15o. Inmunocromatografia

PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DEL ECUADOR
ESCUELA DE BIOANLISIS
BIO-QUMICA
MANUAL DE LABORATORIO DE INMUNOLOGA BSICA
SEMESTRE 2014-2015.
QUINCEAVA PRCTICA
ELISA POR CROMATOGRAFA
Contenido
1.- INTRODUCCIN .................................................................................................................. 2
2.- DIAGNSTICO DEL EMBARAZO...................................................................................... 3
3.- PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA: ............................................................................. 6
4.- CUESTIONARIO.- ................................................................................................................ 6
5.- BIBLIOGRAFA ................................................................................................................. 7
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SEMESTRE 2014-2015.
1.- Introduccin
Embarazo: estado fisiolgico durante el cual se producen cambios metablicos y
bioqumicos reversibles tras el parto.
Los tests de embarazo ms habituales son los que se basan en la deteccin en orina de la
hormona Gonadotropina Corinica Humana subunidad hCG (human Chorionic
Gonadotropin). Las clulas placentarias (sincitiotrofoblastos) comienzan a producir esta
hormona en respuesta a la implantacin del zigoto fertilizado en el tero. Esto ocurre
aproximadamente 6 das despus de la fecundacin. La concentracin sangunea de esta
hormona se duplica cada 48 horas, lo que permite que existan algunos test de embarazo
que, en funcin a la cantidad de hCG indiquen el tiempo de embarazo. En general la
sensibilidad de estos test hace que detecten la hCG a los 14 das de embarazo.
A nivel tcnico los test de embarazo comercial se basan en el Gold Absorbed Inmuno
Assay (GAIA) y utilizan una cromatografa en capa fina. Es decir, una tcnica en la que a
travs de una lmina de textura parecida al papel, asciende por capilaridad un lquido (en
este caso la orina de la embarazada). La lmina contiene anticuerpos monoclonales que
reconocen hCG especficamente y que no se unen a ninguna otra protena de la orina de la
embarazada. Un anticuerpo puede reconocer dos hCG formando mallas de alto peso
molecular que el lquido, en su avance, no puede arrastrar (precipitan). Esto forma la
primera de las bandas del test, que indica un positivo para embarazo. La banda que se
encuentra al extremo opuesto a la zona de aplicacin de la orina es el control positivo.
Indica que haba anticuerpos en la lmina y que estos han avanzado con el lquido hasta el
final de la lmina, quedando all retenidos. Esta banda siempre aparece en los test, tanto
positivos como negativos, porque hay anticuerpo anti hCG en exceso. El control positivo
indica que la prueba ha sido vlida en caso de resultado negativo (descarta que el
negativo se deba a la ausencia de anticuerpo).
La deteccin de hCG tambin juega un papel importante en la deteccin y tratamiento de
modalidades patolgicas de embarazo. Sirva como ejemplo el embarazo ectpico. Su
diagnosis puede basarse en la aparicin de sntomas propios de embarazo acompaados
de una ausencia de produccin hCG. Esto ocurre porque los trofoblastos no son
estimulados por la implantacin ectpica del zigoto. Su tratamiento se realiza con
metotrexato. Sin embargo, si este feto ectpico consigue estimular a los trofoblastos y se
genera hCG el tratamiento para el embarazo ectpico ha de hacerse mediante ciruga.
La deteccin de hCG permite adems aclarar el diagnstico entre varios cnceres de difcil
diferenciacin: cncer testicular metastatizado y sarcoidosis sistmica.
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2.- Diagnstico del embarazo

La gonadotropina corinica humana (hCG) es una protena compuesta por dos
subunidades y .
Subunidad : es caracterstica de esta hormona por tanto se utiliza para el diagnostico
del embarazo.
(hCG) aumenta rpidamente al comienzo de la gestacin y ms tarde disminuye,
especialmente en el tercer trimestre.
El anlisis de -hCG se puede hacer en orina en suero
o En orina: se puede detectar unos das despus de la falta de la menstruacin.
o En suero: un da despus de la implantacin en el tero
Anlisis en orina
-Determinacin cualitativa: rpido, fcil y fiable
-Conviene realizarlo en la primera orina de la maana
Pruebas de anticuerpos monoclonales inmovilizados:
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Anlisis en suero
- Anlisis cuantitativos
- Mtodos ms utilizados: RIA y ELISA
ELISA EN CROMATOGRAFA
Objetivos:
a. -Conocer la cromatografa como tcnica para la determinar la identidad y
concentracin de los componentes de una mezcla.
b. -Separar mezclas de sustancias, observando as sus caractersticas y los factores
que en ella intervienen.
Qu es la Cromatografa?
La inmunocromatografa es una de las tcnicas de inmunodiagnstico ms modernas cuyas
principales ventajas son la simplicidad y rapidez de la prueba. Cada vez son ms las aplicaciones de
esta tcnica, tanto en el mbito de los test, debido a que no es necesario reactivos ni
instrumentacin adicional, como en el campo clnico. El ejemplo ms conocido son los test de
embarazo de las farmacias, Antgeno Prosttico Total (PSA), test de Troponina I y recientemente
test sobre el VIH.
Se puede realizar mediante un dispositivo simple desarrollado para detectar la presencia

( la ausencia) de un compuesto objetivo en la muestra (la matriz). Este tipo de pruebas
son utilizadas comnmente para el diagnstico mdico tanto para pruebas en casa, de
empleo en el laboratorio. Se presenta en un formato de tira, en el cual la muestra
problema fluye a lo largo de un sustrato slido por medio de una accin capilar.
Fundamento
La inmunocromatografa se basa en la migracin de una muestra a travs de una
membrana de nitrocelulosa. La muestra es aadida en la zona del conjugado, el cual est
formado por un anticuerpo especfico contra uno de los eptopes del antgeno a detectar y
un reactivo de deteccin. Si la muestra contiene el antgeno problema, ste se unir al
conjugado formando un complejo inmune y migrar a travs de la membrana de
nitrocelulosa. Si no, migrarn el conjugado y la muestra sin unirse.
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La zona de captura est formada por un segundo anticuerpo especfico contra otro
eptope del antgeno. Al llegar la muestra a esta zona, los complejos formados por la unin
del antgeno y conjugado quedarn retenidos y la lnea se colorear (muestras positivas).
En el caso contrario las muestras son negativas.
La zona control est formada por un tercer anticuerpo que reconoce al reactivo de
deteccin. Cuando el resto de muestra alcanza esta zona, el anticuerpo se unir al
conjugado libre que no ha quedado retenido en la zona de captura. Esta lnea es un
control de que el ensayo ha funcionado bien, porque se colorea siempre, con muestras
positivas y negativas.
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3.- Procedimiento de la Prctica:

1. Obtener suero de pacientes que se sospechen de embarazo
2. Colocar una gota del suero en el casete en la tira de Cromatografa de capa fina
3. Esperar pocos minutos para observar la evidencia de las lneas de Control Positivo,
y si fuera Positiva la prueba, la lnea que lo abaliza.
4. Si no fuera positivo el embarazo no se observa sino una sola lnea, la del Control
Positivo.
4.- Cuestionario.1. El diagnstico del embarazo se basa en la presencia, en sangre en orina de

2. En el diagnstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados
participan tres anticuerpos diferentes. Identifquelos.
3. Cul de ellos est marcado con partculas de color? Cul es mvil?
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4. En el diagnstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados,

debe aparecer siempre al menos una lnea para qu sirve? Cmo se forma?
5. En el diagnstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados
Cmo se forma la banda que nos indica que el resultado es positivo?
5.- Bibliografa
a. Gonadotropin-releasing hormone/human chorionic gonadotropin beta based

recombinant antibodies and vaccines. J Reprod Immunol. 2009 Dec;83(1-2):158-63.
Epub 2009 Oct 24.
b. Human chorionic gonadotropin tests. Expert Rev Mol Diagn. 2009 Oct;9(7):721-47.
c. Ectopic pregnancy; risk factors and comparison of intervention success rates in
tubal ectopic pregnancy. Clin Exp Obstet Gynecol. 2011;38(1):67-70
d. A diagnostic dilemma: metastatic testicular cancer and systemic sarcoidosis a
review of the literature. Case Rep Oncol. 2011 Mar 2;4(1):118-24
e. Risk factors for persistent gestational trophoblastic neoplasia. J Exp Ther Oncol.
2011;9(1):81-4
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