Agar Macconkey Sorbitol PDF

INSTRUCCIONES DE USO
MEDIOS EN PLACA LISTOS

PARA USAR
PA-254455.03 Rev.: Junio de 2003
BD MacConkey Agar with Sorbitol
USO PREVISTO
BD MacConkey Agar with Sorbitol (agar MacConkey con sorbitol BD), tambin conocido
como Sorbitol MacConkey Agar (SMAC) es un medio de diferenciacin parcialmente selectivo
para el aislamiento de E. coli O157:H7 a partir de muestras clnicas, veterinarias, alimentarias y
medioambientales.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO

Mtodo microbiolgico.
E. coli enterohemorrgica (EHEC) O157:H7 fue reconocida por primera vez como patgeno
humano en 19821. Hasta el da de hoy, el serotipo O157:H7 es, sin lugar a dudas, el organismo
responsable de esta enfermedad con mayor frecuencia, aunque de vez en cuando otros
serotipos de E. coli pueden estar involucrados en este tipo de infeccin u otras similares2.
Debido a la produccin de toxinas similares a Shiga (SLT, verocitotoxina), el serotipo O157:H7
de E. coli es conocido por estar involucrado en casos de diarrea, colitis enterohemorrgica
grave y el sndrome urmico hemoltico (HUS). En trminos epidemiolgicos, el sndrome es
una enfermedad de transmisin por va alimentaria, a menudo relacionada con el consumo de
carne bovina poco cocida u otros alimentos derivados de fuentes animales tales como leche
cruda2-5.
Habitualmente, las cepas O157 son diferentes de las cepas normales de E. coli por dar
resultado negativo a sorbitol y beta-glucuronidasa (-gluc). Por tanto, se pueden diferenciar de
E. coli normal mediante pruebas bioqumicas, cuando se incluyen los sustratos adecuados en
los medios bacteriolgicos. El agar MacConkey Sorbitol (= SMAC) fue uno de los medios que se
utilizaron primero para aislar estos organismos6,7.
El agar MacConkey con sorbitol es una modificacin de la frmula proporcionada por Rappaport
y Henig para aislar los serotipos 011 y 055 de Escherichia coli enteropatgena8. Se ha descrito
la utilidad de este medio para detectar E. coli O157:H7, un patgeno humano asociado con la
colitis hemorrgica9-11. Este medio emplea D-sorbitol y no lactosa para aislar y diferenciar los
serotipos enteropatgenos de E. coli que tienden a dar resultados negativos a sorbitol. Se
puede utilizar para el anlisis de muestras clnicas y alimentos8-13.
En BD MacConkey Agar with Sorbitol, las peptonas son fuentes de nitrgeno. D-Sorbitol es
un carbohidrato fermentable. La mayora de las cepas hemorrgicas de E. coli no fermentan D-
sorbitol y producen colonias incoloras en agar MacConkey Sorbitol. Las sales biliares y el cristal
violeta son agentes selectivos que inhiben el crecimiento de organismos gram positivos. El rojo
neutro es un indicador del pH.
REACTIVOS
Frmula aproximada* por litro de agua purificada
Peptonas 20,0 g
D-Sorbitol 10,0
Sales biliares 1,5
Cloruro sdico 5,0
Rojo neutro 0,03
Cristal violeta 0,001
Agar 15,0
pH 7,1 0,2
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
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PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminacin microbiana, decoloracin,
deshidratacin, rajaduras o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulacin asptica, riesgos biolgicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL

Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 8 C, en su
envase original hasta momentos antes de su utilizacin. Evitar la congelacin y el
sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (vase la
etiqueta del paquete) e incubarse durante los perodos de incubacin recomendados.
Las placas de pilas abiertas de 10 unidades pueden utilizarse durante una semana cuando se
almacenan en un rea limpia a una temperatura de 2 8 C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO

Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, vase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar durante 18 24 h a 35 37 C.
Cepas Resultados del crecimiento
Escherichia coli O157:H7 Crecimiento de bueno a excelente; colonias
NCTC 12900* (resultado negativo a incoloras o beige
sorbitol)
Escherichia coli ATCC 25922 (resultado Crecimiento; colonias de color de rosado a rosa
positivo a sorbitol)
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Inhibicin de parcial a completa
* NCTC 12900 se recomienda para control de calidad sistemtico dado que no produce toxinas. La cepa
se puede solicitar de la National Collection of Type Cultures, de Londres, R.U. Para obtener informacin
consultar www.phls.co.uk/labservices/nctc/qcrefsets.htm
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados:
BD MacConkey Agar With Sorbitol (placas Stacker de 90 mm). Controladas
microbiolgicamente.
Material no suministrado:
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Este medio se utiliza para el aislamiento de Escherichia coli O157:H7 (y otros serotipos
negativos a sorbitol) a partir de muestras fecales de pacientes con posible infeccin de este
agente, y de alimentos, muestras veterinarias y medioambientales (vase tambin
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO).
PROCEDIMIENTO DE ANALISIS
Extender las muestras directamente en placa con el medio, o utilizar un medio ya enriquecido,
tal como el caldo de soja trptica modificada selectiva o separacin inmunolgica (IMS) con
Dynabeads, siguiendo las instrucciones del fabricante, y subcultivar en BD MacConkey Agar
with Sorbitol. Las tcnicas con medios ya enriquecidos son especialmente tiles si las
muestras estn contaminadas con flora normal14,15. Para aislar E. coli O157:H7 directamente de
las muestras fecales, inocular las muestras fecales o torundas rectales en una pequea zona de
un cuadrante y extender para su aislamiento. As se hace posible el desarrollo de colonias
discretas. Se recomienda inocular tambin un medio con un nivel ms alto de selectividad, por
ejemplo, BD CHROMagar O157. Incubar en atmsfera aerobia a 36 2 C durante 18 24 h.
Resultados
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Los organismos fermentadores de sorbitol producen colonias de color rosa en BD MacConkey
Agar with Sorbitol. Los organismos que no fermentan sorbitol, tales como E. coli O157:H7, son
incoloros. Las colonias identificadas presuntivamente por el color de sus colonias deben
confirmarse como E. coli O157:H7 mediante mtodos serolgicos o moleculares para la
deteccin del serotipo y/o de las toxinas6,9,12,13.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

BD MacConkey Agar with Sorbitol es un medio estndar para el aislamiento de los serotipos
de E. coli con resultado negativo a sorbitol, en especial O157:H7, a partir de muestras clnicas y
de otros materiales6-13,16.
En una incubacin prolongada, las cepas de E. coli O157:H7 pueden fermentar sorbitol.
Es posible que se pierda el color de las colonias con resultado positivo a sorbitol, lo que dificulta
su diferenciacin de las colonias con resultado negativo a sorbitol.
Existen cepas con resultado negativo a sorbitol que incluyen serotipos diferentes de O157:H7 y
que pueden producir o no toxinas y sntomas clnicos2. BD MacConkey Agar with Sorbitol no
diferencia entre las cepas de E. coli O157 productoras y no productoras de toxinas.
Las cepas de otros organismos que no fermentan sorbitol (tales como Escherichia hermannii)
pueden crecer en el agar MacConkey Sorbitol.
Se requieren inevitablemente pruebas de confirmacin tales como mtodos serolgicos o
moleculares para la deteccin del serotipo y/o las toxinas, para lograr una identificacin final de
las cepas de E. coli O157 aisladas de BD MacConkey Agar with Sorbitol u otro medio de
aislamiento para este organismo2,6,9,12,13.
Slo en raras ocasiones es posible detectar en un nico medio todos los patgenos potenciales
involucrados. Por tanto, se recomienda cultivar muestras apropiadas tambin en BD
CHROMagar O157.
REFERENCIAS
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PA-254455.03 -3-
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Urban & Fischer, Munich, Germany.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
N de cat. 254455 Medios en placa listos para usar, 20 placas
INFORMACIN ADICIONAL
Para obtener ms informacin, dirjase a su representante local de BD.
BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16
Reception_Germany@europe.bd.com
BD Diagnostic Systems Europe

Becton Dickinson France SA
11 rue Aristide Bergs
38800 Le Pont de Claix/France
Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292 http://www.bd.com
BD, BD logo and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company.
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
2003 Becton, Dickinson and Company
PA-254455.03 -4-

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