CPK y LDH

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE
SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II

ELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMAN
GUIA PRCTICA mayo de 2016
CPK
1. OBJETIVO: Determinar cuantitativamente la actividad de la creatina
quinasa (CK) por el mtodo cintico en suero o plasma.
2. DEFINICIONES:
CPK: Enzima que se encuentra en el organismo, especialmente en el msculo

estriado, presenta 3 izoenzimas CK-MM, CK-BB, CK-MB,
Niveles
aumentados en infarto de miocardio pero notable incremento en distrofia
muscular progresiva, se eleva desde 3 hrs. las 6 horas post-infarto,
concentraciones mximas son a las 12-24 hrs. recuperndose los valores
normales entre las 24 y 72 hrs.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:

3.1.Fundamento: La CK cataliza la desfosforilacion de la creatina fosfato
para producir adenosina trifosfato (ATP), que reacciona con la glucosa en
presencia de la hexoquinasa (HK) formando glucosa-6-fosfato. En
presencia de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G-6-PDH), la glucosa6-fosfato es oxidada a 6-fosfogluconato (6-PG) y reduce el NAD a
NADPH. La velocidad de incremento en la absorbancia en 340 nm es
proporcional a la actividad del CK en la muestra.
Creatina Fosfato + ADP
ATP + Glucosa
HK
Glucosa-6-fosfato + NADP
CK
Creatina + ATP
ADP + Glucosa-6-fosfato
G-6-PDH
6-PG + NADPH
3.2.Muestra: Suero o plasma con EDTA o Heparina.

3.2.1.Cantidad: 20 ul
3.2.2.Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco.
3.3.Equipos, materiales y reactivos:
3.3.1.Equipos:
Centrifuga
Espectrofotmetro (Stat Fax )
Bao mara a 37C
Vortex
3.3.2.Materiales:
Micropipetas :10 a 100;100 a 1000 ul
Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)
Reloj marcador
3.3.3.Reactivos:
Reactivos 1
Reactivo 2
3.4.Procedimiento: Enumerar los tubos de la siguiente forma:
REACTIVOS
BLANCO
STANDAR
DESCONOCIDO
Reactivo de
trabajo
Muestra
1 ml
1 ml
20 ul
Preincubar 2 min a 37C.

Leer en el STAT FAX: N de prueba ...
Mezclar inmediatamente en el vortex y disparar el cronometro.
Tiempo de reaccin 5 min (Leer absorbancias a 340 nm cada 60 seg (4 intervalos).
Registrar los resultados e informar.
3.5.Valores de referencia:
Mujeres
Hombres
Adultos
Nios 2 a 14 aos
Adolescentes
:
:
:
26 a 156 U/L
31 a 152 U/L
34 a 147 U/L
26 a 189 U/L
25 a 172 U/L
28 a 142 U/L
4. FORMULARIOS Y REGISTROS: Registro del rea de

registro general de resultados.
5. ANEXOS:
Qumica Clnica y
Sustancias interferentes conocidas:
Suero o plasma con hemlisis visible o intensa.

Valores de bilirrubina 38 mg/dl, triglicridos hasta 1000 mg/dl y
hemoglobina hasta 120
mg/dl no producen interferencias significativas.
Valores de triglicridos ms altos que 1000 mg/dl producen resultados
falsamente disminuidos.
Linealidad
La reaccin es lineal hasta 2000 U/L
Para valores superiores, diluir
con Sol. Fisiolgica y repetir la
determinacin. Multiplicar el resultado por el factor de dilucin
empleado.
Estabilidad y condiciones de almacenamiento:
El reactivo de trabajo es estable por 1 da entre 15- 25 C y 14 das entre 2-8

C, manteniendo el recipiente cerrado, mientras no suceda contaminacin
qumica o microbiana.
Para preservar su desempeo el reactivo debe permanecer fuera del frigorfico
nicamente el tiempo necesario para obtenerse el volumen a ser utilizado.
Evitar exposicin a la luz solar directa.
Una vez abiertos no deben permanecer destapados y fuera del refrigerador
durante lapsos prolongados.
Evitar exposicin a la luz solar directa, durante el manipuleo los reactivos estn
sujetos a contaminaciones de naturaleza qumica y microbiana que puedan
provocar disminucin de la estabilidad.
Almacenamiento y estabilidad del suero:
La actividad enzimtica del CPK es estable 24 hrs. Entre 15 25 C,
7 das entre 2-8C y 4 semanas entre 15-25C. La muestra debe ser
protegida de la accin de la luz.
6. Clculos de los resultados:

CPK U/L = diferencia de Abs / min x factor
Factor a 37 C = 8121
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SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II
ELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMAN
GUIA PRCTICA mayo de 2016
LACTACTO
DESHIDROGENASA - LDH
1. Determinar la concentracin de Lactato Deshidrogenasa en sangre por el mtodo
cintico enzimtico.
2. DEFINICIONES:
LDH: Es una enzima inespecfica que se eleva notablemente en el carcinoma
diseminado, en las anemias hemolticas y megaloblstica por perdida por
perdida de esta enzima en los eritrocitos. Tiene 5 izo enzimas; la fraccin
LDH5 se encuentra en el hgado y msculo estriado, LDH1 en el miocardio y
eritrocitos, en el infarto de miocardio su nivel se eleva entre 12 y 24 Hrs. post
infarto y tiene su mxima concentracin entre 2 y 4 das despus,
permaneciendo elevada entre 8 y 14 das.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
Fundamento: lactato deshidrogenasa cataliza la oxidacin de lactato a piruvato
simultneamente la reduccin del NAD oxidado a NAD reducido con incremento
de las absorbancias a 340 nm.
L-Lactato + NAD+ Alcalino
3.1.
3.2.
3.3.
3.4.
LDH
Piruvato + NADH + H+
Muestra: Suero o plasma con heparina o EDTA

Cantidad: 50 ul.
Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco.
Equipos, materiales y reactivos:
3.4.1. Equipos:
Centrifuga
Espectrofotmetro (Stat Fax)
3.4.2.
3.4.3.
3.5.
Bao mara a 37C

Vortex
Materiales:
Micropipetas :10 a 100;100 a 1000 ul
Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)
Reloj marcador
Reactivos:
Reactivo R1 :buffer
Reactivo R2 : Co-enzima
Procedimiento: Enumerar los tubos de la siguiente forma:
REACTIVOS
Reactivo de
trabajo
Muestra
.
3.6.
BLANCO
DESCONOCIDO
1 ml
1 ml
20 ul
Preincubar 2 min a 37C.

Leer en el STAT FAX: AUXILIAR________
Mezclar inmediatamente en el vortex y disparar el cronometro.
Tiempo de reaccin 2 min 30seg (Leer absorbancias a 340 nm cada 60 seg despus
de los primeros 30 seg.)
Registrar los resultados e informar.
Valores de referencia:
Mujeres : 103 - 227 U/L
Hombres: 80 - 285 U/L
4. ANEXOS:
Anexo 1: Sustancias interferentes conocidas:
Suero o plasma con hemlisis visible o intensa.
Bilirrubinas 20 mg/dl, hemoglobina 10g/l y triglicridos 2000 mg/dl.
Es una Isoenzima termolbil.
Anexo 2: Linealidad:
La reaccin es lineal hasta 1000 U/L.
Para valores superiores, diluir la muestra original 1:2 con Sol. Fisiolgica y
repetir la determinacin. Multiplicar el resultado por el factor de dilucin
empleado.
Anexo 3:Preparacin de reactivos de trabajo:
Reactivo de trabajo: mezclando 5 partes del Rvo. 1 (1 ml) + 1 parte del Rvo.2
(200 ul) de esta mezcla, medir 1ml del premezclado listo para usar.
Los volmenes pueden ser modificados de acuerdo a la necesidad
Estabilidad y condiciones de almacenamiento:
Los reactivos 1 y 2 son estables de 2 a 8C hasta la fecha de vencimiento

indicada en la caja.
Una vez abiertos, no deben permanecer destapados y fuera del refrigerador
durante de lapsos de tiempo prolongados, evitar contaminaciones.
Reactivo de trabajo (premezclado): Es estable por 14 das de 2 a 8 C a partir
de su preparacin.
Almacenamiento y estabilidad del suero:
Lactato Deshidrogenasa en suero es estable de 2 a 3 das a temperatura

ambiente no refrigerar.
5. Clculos de los resultados:
LDH U/L = diferencia de Abs / min x factor
Factor = 3.376
6. CONCLUCIONES E INTERPRETACION

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SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II

CPK: Enzima que se encuentra en el organismo, especialmente en el msculo

3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:

3.2.Muestra: Suero o plasma con EDTA o Heparina.

Preincubar 2 min a 37C.

4. FORMULARIOS Y REGISTROS: Registro del rea de

Sustancias interferentes conocidas:

Suero o plasma con hemlisis visible o intensa.

El reactivo de trabajo es estable por 1 da entre 15- 25 C y 14 das entre 2-8

6. Clculos de los resultados:

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

L-Lactato + NAD+ Alcalino

Muestra: Suero o plasma con heparina o EDTA

Bao mara a 37C

Procedimiento: Enumerar los tubos de la siguiente forma:

Preincubar 2 min a 37C.

La reaccin es lineal hasta 1000 U/L.

Los reactivos 1 y 2 son estables de 2 a 8C hasta la fecha de vencimiento

Lactato Deshidrogenasa en suero es estable de 2 a 3 das a temperatura

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