Práctica 4. Genética

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FACULTAD DE QUÍMICA

QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA

GENÉTICA PRÁCTICA NO. 4 “BANDAS GTG”

DOCENTE:
QFB. MARTHA NORMA ANGELES ÁVILA
PRÁCTICA No.4. BANDAS GTG
OBJETIVO
● Conocer y desarrollar la técnica de bandas GTG, evidenciar su importancia y
utilidad en la citogenética.
● Identificar los cromosomas humanos con la técnica de bandas GTG.

MARCO TEÓRICO
BANDEO CROMOSOMICO
Los cromosomas pueden teñirse de manera homogénea con sólo colocarlos en una
solución de Giemsa (y de otros colorantes comunes), pero algunos métodos de tinción,
pretratamientos, o ambos, producen patrones transversos de bandas teñidas
diferencialmente, las cuales son tan constantes que se consideran especies específicas.
Los protocolos de bandeo cromosómico utilizan las características propias de las bandas
específicas para revelarlas, de manera que se considera que las técnicas usadas para
revelarlas sólo ponen en evidencia un patrón básico de organización del cromosoma. Las
técnicas de bandeo varían desde una simple tinción hasta las que necesitan
pretratamientos complicados antes de teñir por lo general con mezclas de colorantes. Los
pretratamientos revelan características de secuencias de bases, funcionales y
estructurales de diferentes dominios a lo largo del cromosoma.
BANDAS G
● Patrón de bandeo
Los cromosomas teñidos por este procedimiento presentan bandas claras y oscuras a lo
largo del cromosoma. El número de bandas depende del grado de desespiralización de
los cromosomas, aunque por lo general se trabaja con cromosomas de 300 bandas por
set haploide.
● Mecanismo
El mecanismo de bandeo aún no se conoce del todo bien. En 1978, Commings sugirió
que el bandeo ocurre por la presencia intrínseca de cromómeros en el cromosoma, los
cuales forman un patrón de bandeo fundamental que varias técnicas de tinción diferencial
revelan, pero como se revela específicamente cuando se aplica el pretratamiento con
tripsina (bandas GTG) o con calor (GHG), se sugiere que el pretratamiento rearregla la
cromatina dejando surcos de digestión que permiten captar el colorante de Giemsa.
Por otra parte, debido a que se puede obtener un patrón de bandeo G cuando se utilizan
agentes que digieren, desnaturalizan, reducen y oxidan proteínas, se postula que la
cromatina se reorganiza por alteración de proteínas histonas tanto del octámero como de
H1; esto se refuerza por el hecho de que cuando se fija con aldehído o agentes que
hacen uniones cruzadas entre proteína-proteína y proteína-DNA, no aparecen las bandas
G.
Bandeo GTG: Bandas G obtenidas con Tripsina y Giemsa. Los cromosomas son
tratados/expuestos enzimáticamente con tripsina (acción enzimática controlada), que
desnaturalizan su contenido proteico, y que son teñidos posteriormente con colorante
Giemsa, presentando un patrón de bandas oscuras y claras característicos que permite
su identificación.
Aplicaciones
En la citogenética médica es la técnica más utilizada, ya que proporciona una secuencia
nítida de bandas claras y oscuras; tiene la ventaja de ser permanente y el análisis puede
realizarse al microscopio de luz. Las bandas G permiten:
○ Corroborar alteraciones cromosómicas previstas antes por el cuadro clínico.
○ Identificar cromosomas o regiones cromosómicas implicadas en rearreglos
evidentes con tinción homogénea para dar un asesoramiento genético adecuado.
○ Detectar aberraciones estructurales que podrían pasar desapercibidas con la
técnica de tinción homogénea.
○ Hacer correlación cariotipo-fenotipo y delinear nuevos síndromes cromosómicos.
○ Localización y mapeo de genes en cromosomas y bandas específicas.
○ Bandeo G es la técnica que en todo el mundo se usa como referencia de la
diferenciación longitudinal de los cromosomas.
○ Estudios Genotoxicologicos: Con diferentes técnicas se puede conocer la magnitud
del daño al DNA y evaluar el riesgo para el individuo o su descendencia de
desarrollar un evento maligno o tener hijos con diferentes grados de afectación.
CITOGENÉTICA
La citogenética es el estudio de los cromosomas y de las enfermedades relacionadas,
causadas por un número o una estructura anómalas de los cromosomas. Para obtener
células con sus cromosomas en estado condensado, se las expone a un inhibidor de la
mitosis, que bloquea la formación del huso mitótico y detiene la división celular en la etapa
de metafase.
Se pueden usar distintos tejidos para obtener preparaciones de cromosomas; por
ejemplo, sangre periférica, médula ósea, líquido amniótico y productos de la concepción.
Aunque las técnicas específicas difieren según cuál sea el tejido, el método básico para
obtener preparaciones de cromosomas es así:
● Recolección de la muestra y preparación inicial.
● Cultivo celular.
● Adición de un inhibidor de la mitosis para detener las células en la metafase.
● Recogida de las células. Este paso es muy importante para obtener
preparaciones de alta calidad. Implica exponer las células a una disolución
hipotónica, seguida de una serie de disoluciones fijadoras. Esto hace que las
células se expandan, de modo que los cromosomas se extiendan y puedan
examinarse individualmente.
● Tinción de las preparaciones cromosómicas para detectar los posibles cambios
numéricos y estructurales.
Prácticamente todos los análisis citogenéticos de rutina se realizan sobre preparaciones
cromosómicas que se han tratado y teñido para producir un patrón de bandas específico
de cada cromosoma. Esto permite la detección de cambios sutiles en la estructura de los
cromosomas. El tratamiento de tinción más común se llama bandeo G. Se dispone de
otras técnicas de tinción que ayudan a identificar anomalías específicas. Una vez que se
han obtenido las preparaciones de cromosomas metafásicos teñidos, pueden examinarse
al microscopio. Típicamente, se observan y se cuentan entre 15 y 20 células, con un
análisis completo de al menos 5 de ellas. Durante un análisis completo, cada cromosoma
se compara críticamente banda por banda con su homólogo. Es necesario examinar
tantas células para poder detectar un mosaicismo, con significado clínico.
Tras el análisis al microscopio, se toman imágenes de aquellas células en metafase que
tengan mejor calidad, bien mediante fotografía o por digitalización de imagen
computerizada. Los cromosomas pueden entonces disponerse en pares de acuerdo con
su tamaño y su patrón de bandas, constituyendo así un cariotipo. Éste permite al analista
citogenético examinar aún más en detalle cada cromosoma en busca de cambios
estructurales. Se hace entonces una descripción por escrito del cariotipo, definiendo así el
análisis cromosómico.

IMPORTANCIA BIOLÓGICA DE LAS BANDAS CROMOSÓMICAS

El descubrimiento de las técnicas de bandeo cromosómico ha significado un considerable


progreso tanto en citogenética humana como en citogenética general ya que, al poder
obtenerse imágenes reproducibles de la existencia de estructuras cromosómicas
transversales (bandas) de diferente tamaño a lo largo de los cromosomas, fue posible
disponer de una herramienta de identificación de cada cromosoma humano, así como
otros organismos tanto animales como vegetales. Adicionalmente, esta metodología
permitió localizar con certeza los puntos de fractura observados en la mayoría de los
reordenamientos estructurales y establecer qué cromosomas estaban involucrados en
dichas aberraciones.

Estas posibilidades citológicas produjeron un gran impacto especialmente a nivel clínico


ya que permitieron diferenciar y caracterizar citogeneticamente un elevado número de
nuevos síndromes de malformación y retardo mental congénitos. Asimismo, la más
reciente y significativa aplicación de las bandas cromosómicas ha sido en el programa del
genoma humano ya que, tanto genes como síndromes génicos, son ahora ubicados
habitualmente en los mapas de bandas cromosómicas.

El gran valor de los diversos patrones de bandeo es que caracterizan a cada cromosoma
de diversas especies de entidades biológicas superiores, excepto los vertebrados
inferiores que no las poseen.

Todos estos son mecanismos evolucionarios que aseguran la eliminación de la población


de individuos portadores de alteraciones genéticas perjudiciales. Asimismo, estos
extraordinarios avances citogenéticos han ocurrido en menos de cuatro décadas de
investigaciones y perfeccionamientos metodológicos revolucionando profundamente la
genética humana al esclarecer racionalmente el origen de un enorme número de
enfermedades hereditarias.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

MATERIALES REACTIVOS

Vasos Coplin Tripsina

Microscopio de campo claro Colorante de Wright

Colorante GIEMSA

Buffer de fosfatos

METODOLOGÍA
CONCLUSIONES
1. ¿Cuál es la importancia de las bandas G en un cariotipo?
Se obtienen cromosomas con un menor grado de compactación, además de que al aplicar
el bandeo G, se observa un mayor número de bandas, permitiendo evaluar microarreglos
cromosómicos.
2. ¿Por qué se maduran las preparaciones a 60°C previo a la técnica?
Es necesario debido a que las muestras deben deshidratarse para que el bandeo sea
óptimo.
CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el mecanismo por el cual la tripsina induce bandas G?
La tripsina juega un papel muy importante en el bandeo G ya que desnaturaliza las
proteínas asociadas a los cromosomas y tiñe regiones r icas en A-T, zonas que son
transcripcionalmente inactivas, pobres en genes y en secuencias Alu.
➔ Rearregla la cromatina dejando surcos de digestión que permiten captar el
colorante de Giemsa.
Cabe mencionar que las proteínas no histónicas son muy sensibles a la tripsina, sobre
todo aquellas de alto peso molecular, mientras que las histonas parecen ser resistentes a
la tripsinización.
2. ¿Qué significa GTG?
El bandeo G o bandeo GTG (Giemsa-Tripsina-Giemsa) es un procedimiento mediante el
cual los cromosomas son expuestos a la acción enzimática controlada. Al ser
posteriormente teñidos, presentan un patrón de bandas oscuras y claras característicos
que permite su identificación. De esta manera permite detectar aneuploidías (ganancias
y/o pérdidas cromosómicas) y aberraciones estructurales.
3. ¿Qué es el nivel de resolución de las bandas cromosómicas?
Es una técnica que consiste en obtener cromosomas con un menor grado de
compactación, que es lo mismo que decir, con una mayor longitud. Al aplicar bandeo G,
se observa un mayor número de bandas, permitiendo evaluar microarreglos
cromosómicos (>4-5 Mb).
El uso de técnicas de sincronización, en conjunto con agentes que se intercalan en el
ADN y evitan la contracción cromosómica, resulta en un sustancial incremento de índice
mitótico, la morfología cromosómica y fundamentalmente del nivel de resolución de las
bandas. El nivel de resolución de bandas sobre estos cromosomas es mayor a 550
bandas por complemento haploide llegando incluso a cromosomas de 800 a 1000
bandas, mientras que en el cariotipo de rutina está en el rango de 400-550 bandas.

Cuando se detiene el proceso de división celular y se realiza la tinción en una fase más
prematura de la mitosis (prometafase), los cromosomas son más largos y aparecen
aproximadamente 700-1200 bandas. En una fase posterior de la mitosis (metafase), los
cromosomas están más condensados y aparecen aproximadamente 300-600 bandas.
Cuanto mayor es el nivel de bandas, mejor es la resolución, lo que permite identificar
anomalías cromosómicas más sutiles, así como sus puntos de rotura.
4. ¿De qué depende la resolución de bandas de cromosomas en un cultivo?
Explique.

La resolución de bandas de cromosomas depende del número de células en


profametafase en el momento de la cosecha pues incrementar estas también la
resolución será mejor. Para lograr dicho incremento se sincronizan las células en
división bloqueando la síntesis de ADN con un inhibidor como por ejemplo el
metotrexano.

CONCLUSIONES
Sin duda alguna, la citogenética y las técnicas de bandeamiento (en este caso bandeo
GTG), han sido uno de los descubrimientos más útiles en la sociedad, su importancia
radica en la diferentes aplicaciones que tiene, primordialmente para la detección de los 4
tipos existentes de enfermedades, síndromes o anomalías genéticas (enfermedades de
herencia mendeliana o monogénica, enfermedades multifactoriales, enfermedades
mitocondriales y enfermedades cromosómicas) esto con el fin de realizar un buen
diagnóstico. Cabe mencionar que, para que los citogenetistas puedan realizar un buen
trabajo y organizar los cromosomas en un cariotipo las células deben estar en metafase
pues esta resolución permite disponerlos en pares.
REFERENCIAS
● Guizar J. (2001). Genética clínica: Diagnóstico y manejo de las enfermedades
hereditarias. 3° Ed. México: Editorial. El Manual Moderno. Págs. 155,157,158
● Biomodel, (SF). Citogenética básica. Disponible en:
http://www3.uah.es/biomodel/citogene/dynacare/geninfo.htm [Consultado el día 04
de marzo de 2021]
● Drets M. (2002). Una saga citogenética: El descubrimiento de los métodos de
bandeo cromosómico. Significado y proyección bio-médica. Rev. Méd. Uruguay.
Vol.18 no.2 Montevideo set. Recuperado de:http://www.scielo.edu.uy/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1688-03902002000200003 [Consultado el día 04 de marzo
de 2021]
● Urioste, C. (2008). Caracterización cromosómica e inmunolocalización de
proteínas relacionadas con la estructura de la cromatina en una población del
complejo Ctenomys Pearsoni (Tesis de Licenciatura). Universidad de la República.
Pág. 25
● Crane, C. & Silva, E. (1998). Manual de procedimientos de técnicas de alta
resolución comosómica. Bogotá: Instituto Nacional de Salud. Pág.21
● Silva, C., Contreras, N, & Fonseca, D. (2008). Utilidad de la citogenética en la
medicina actual. Visión histórica y aplicación. Bogotá: Educación y práctica de la
Medicina. Recuperado de: http://www.scielo.org.co/pdf/amc/v33n4/v33n4a9.pdf
[Consultado el día 04 de marzo de 2021]

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