A estrutura de muitas moléculas presentes na composição celular e, por conseguinte, a grande maioria dos processos

bioquímicos são extremamente sensíveis a variações de pH.

Nos seres humanos, o pH plasmático deve ser mantido em torno de 7,4 em uma faixa muito estreita de variação —
decréscimos a valores próximos de 7,0 têm sérias consequências. Intracelularmente, a restrição se repete: um exemplo
suficiente da importância do pH na fisiologia celular é dado pela sua interferência na atividade das enzimas, catalisadores
de todas as reações químicas celulares. Muitas destas reações processam­se com liberação ou captação de prótons do meio
aquoso em que estão dissolvidas as substâncias presentes na célula. Ainda assim, o valor do pH celular ou plasmático é
mantido praticamente fixo. A manutenção do pH ideal é conseguida pelos seres vivos graças à existência dos sistemas­
tampão.

1.1 Ácidos e bases de Brönsted

Para definir sistema­tampão e compreender suas propriedades, é conveniente recorrer à definição de Brönsted para
ácidos e bases. Brönsted definiu ácidos como substâncias capazes de doar prótons e bases como substâncias capazes de
recebê­los. Segundo esta definição, são classificados como ácidos, por exemplo, HCl, H 2SO 4, H 3C– COOH, NH +1 e H 3C–
NH 3+, pois podem dissociar­se, liberando prótons:

HCl → Cl− + H+
H2SO4 → HSO4− + H+
H3C–COOH → H3C–COO− + H1
NH4+ → NH3 + H+
H3C–NH3+ → H3C–NH2 + H1

Generalizando, a equação de dissociação de um ácido (HA) é:

HA → A + H +

ou

HB+ → B + H +

O íon (Cl–, HSO 4– etc.) — ou a molécula (NH 3, H 3C– NH 2) — resultante da dissociação é denominado base conjugada
do ácido, já que pode receber um próton, convertendo­se novamente no ácido conjugado respectivo.
Alguns ácidos, chamados ácidos fortes, dissociam­se totalmente quando em soluções diluídas — é o caso, por
exemplo, de HCl e H 2SO 4. Outros, os chamados ácidos fracos, ionizam­se muito pouco. Para estes ácidos, pode­se
escrever:

HA ⇌ A + H +

Esta equação indica que, em solução aquosa, o ácido fraco HA dissocia­se, produzindo as espécies A e H + que,
juntamente com a parte não dissociada, HA, compõem um equilíbrio químico. A constante de equilíbrio desta dissociação
é:

Em reações deste tipo, a constante de equilíbrio é geralmente chamada constante de dissociação ou de ionização,
representada por K a. A Tabela 1.1 apresenta alguns ácidos fracos e os valores de sua constante de dissociação e de seu pK a
(pK a = – log K a). São todos ácidos fracos, mas com forças ácidas variáveis — quanto menor o valor de K a (ou maior o valor
de pK a) mais fraco será o ácido e mais forte será a sua base conjugada. O significado de pK a está detalhado na Seção 1.2.

Tabela 1.1 Variação de força ácida entre os ácidos fracos.

Ácido conjugado Base conjugada Ka(M) pKa

Ácido acético CH3COOH Acetato CH3COO – 1,7 × 10 – 5 4,76

Ácido carbônico* H2CO3 Íon bicarbonato HCO3– 1,7 × 10 – 4 3,77

Íon bicarbonato HCO3– Carbonato CO32 – 6,3 × 10 – 11 10,2

Ácido lático CH3CHOHCOOH Lactato CH3CHOHCOO – 1,4 × 10 – 4 3,86

Ácido fosfórico H3PO4 Íon di-hidrogênio fosfato H2PO4– 7,2 × 10 – 3 2,14

Íon di-hidrogênio fosfatoH2PO4– Íon mono-hidrogênio fosfatoHPO42 – 1,4 × 10 – 7 6,86

Íon mono-hidrogênio fosfato HPO42– Íon fosfato PO43 – 3,9 × 10 – 13 12,4

Íon amônio NH4+ Amônia NH3 5,6 × 10 – 10 9,25

* Os dados da tabela referem­se a 25°C. A 37°C, o valor da constante de dissociação (K a) do ácido carbônico é 2,7 × 10 – 4M e o pK a é
3,57. No plasma humano, nas condições atmosféricas habituais, esses valores mudam para 8,1 × 10 – 7M e 6,1, respectivamente.

1.2 Sistemas-tampão: de䊅�nição e propriedades

Um sistema-tampão é constituído por um ácido fraco e sua base conjugada
Os ácidos fracos têm para a Bioquímica um interesse particular, pois junto às suas bases conjugadas, constituem os
sistemas­tampão, capazes de impedir grandes variações de pH quando da adição de ácidos ou álcalis. Um sistema­tampão
é denominado pela sua base conjugada: tampão acetato, tampão fosfato etc.
Segue­se a descrição do modo pelo qual um sistema­tampão hipotético, formado pelo ácido HA e sua base conjugada
A, reage à adição de um ácido forte, ou seja, à adição de prótons, já que o ácido forte dissocia­se completamente. Quando
se adiciona H + ao equilíbrio formado pelo ácido, base conjugada e prótons (HA ⇌ A + H +), o sistema­tampão reage por
intermédio da base conjugada (A), que se associa a prótons, transformando­se no ácido (HA).
Dois aspectos desta associação são importantes. Primeiramente, o simples fato de haver uma associação deixará livre
um número de prótons menor do que se a base A não estivesse presente, pois, neste caso, todos os prótons adicionados
ficariam livres. Em outras palavras, o pH irá diminuir, mas muito menos do que diminuiria se a mesma quantidade de
prótons fosse adicionada a um meio desprovido da base conjugada de um ácido fraco — água ou uma solução de NaCl,
por exemplo.
Em segundo lugar, deve­se notar que o tampão constitui um equilíbrio químico, regido por uma constante de equilíbrio
(K eq) e, por isto, nem todos os prótons adicionados associam­se à base conjugada. Se isto ocorresse, o número de prótons
em solução seria o mesmo que antes da adição; a concentração de A seria menor e a concentração de HA seria maior. Com
estes novos valores para as concentrações das espécies, o valor da constante de equilíbrio seria diminuído, o que é absurdo.

Na realidade, embora a maior parte dos prótons adicionados associem­se a A, uma pequena parte fica livre, em solução.
O valor final da concentração de [H +] será, portanto, um pouco maior do que antes da adição; o de A será menor e o de HA,
maior. Desta forma, o valor da constante de equilíbrio é mantido:

Quando se adiciona um álcali ao sistema­tampão, o resultado é análogo ao caso anterior. Os íons OH –, provenientes de
um álcali como NaOH, associam­se com prótons do meio, formando H 2O.
 OH – + H + ⇌ H 2O

A adição do álcali corresponde, portanto, à retirada de prótons do meio. Neste caso, o equilíbrio químico que constitui
o tampão reagirá por dissociação do ácido HA. Entretanto, nem todos os prótons que se associaram a OH – serão repostos
por esta dissociação — se isto ocorresse, novamente ter­se­ia uma variação no valor da constante de equilíbrio:

O que efetivamente ocorre é que a dissociação do ácido repõe a maior parte, mas não todos os prótons que se
associaram a OH –. Haverá, portanto, uma diminuição da concentração de prótons, ou um aumento no valor do pH, muito
menor, entretanto, do que aquele que ocorreria se não houvesse reposição alguma, como no caso da adição do álcali à água
ou a uma solução de NaCl.
Neste caso, a concentração final de H + será um pouco menor do que a inicial; a de A, maior; e a de HA, menor,
mantendo o equilíbrio:

Concluindo, dissociando o ácido quando se adiciona um álcali ou associando próton e base conjugada quando se
adiciona um ácido forte, o sistema­tampão previne variações acentuadas de pH. Esta propriedade é consequência da
existência concomitante das formas ácido e base conjugada e, embora a soma (HA + A) permaneça sempre constante, a
concentração das espécies varia de acordo com o tipo — H + ou OH − — e a quantidade dos íons adicionados.

1.3 Fatores que determinam a e䊅�ciência de um sistema-tampão

A e䊅�ciência de um tampão está restrita a uma faixa de pH
A solução de um ácido fraco apresenta uma concentração de HA muito maior do que de A, como resultado da pequena
dissociação que é característica do ácido fraco. Se esta solução for submetida à adição contínua de álcali, haverá
dissociação progressiva do ácido, cuja concentração diminuirá, e um consequente aumento da concentração de A,
acompanhados de aumento no valor de pH. Se a quantidade de álcali adicionado for grande, a concentração de HA acaba
tornando­se tão reduzida que passa a ser insuficiente para compensar, com sua dissociação, novas adições de álcali. A
partir deste ponto, o pH sofrerá aumentos significativos a cada nova adição de álcali, mostrando que o sistema perdeu suas
propriedades de tampão. O mesmo ocorrerá quando, com constante adição de prótons, esgotar­se praticamente a espécie
base conjugada — novas adições de prótons, que não encontrarão mais base conjugada à qual associar­se (e, portanto,
permanecerão em solução), provocarão queda acentuada de pH. O sistema não estará mais se comportando como sistema­
tampão (Figura 1.1).
Deduz­se, do exposto, que a ação tamponante está restrita a uma faixa de pH na qual as concentrações de ácido e base
conjugada são suficientes para compensar adições de álcali ou de ácido. Fora do intervalo de tamponamento, como a soma
(HA + A) é constante, têm­se as situações seguintes:
[HA] [A]
Grande adição de álcali ≅ 0% ≅ 100%
Grande adição de ácido ≅ 100% ≅ 0%
Figura 1.1 Titulação de um ácido fraco com álcali (a) e com ácido (b). Na região assinalada, as adições de álcali ou ácido
provocam pequenas variações de pH; fora desta região, a variação é grande. Nas ordenadas, está assinalado o pH em que há 50% de
dissociação do ácido.

Uma situação apresenta interesse particular: na faixa de pH em que a ação tamponante é exercida haverá,
obrigatoriamente, um valor de pH em que exatamente 50% do total inicial do ácido estão associados, os 50% restantes
estando na forma de base conjugada. Tal condição será verificada em um valor de pH definido e característico para cada
tampão. É nesta situação, ou é neste valor de pH, que o sistema­tampão tem sua eficiência máxima, por existirem,
simultaneamente, as maiores concentrações possíveis de ácido e base conjugada. Ao redor deste valor de pH, uma unidade
acima ou uma unidade abaixo (região assinalada na Figura 1.1), o tampão ainda é eficaz; além deste intervalo, o sistema
deixa de atuar como tampão.
A determinação do pH em que há 50% de dissociação do ácido pode ser obtida experimentalmente por titulação:
tomando­se uma solução de um ácido fraco e medindo­se o valor de pH após cada pequena adição de álcali, obtêm­se
valores que são representados pelo gráfico da Figura 1.1 a. A curva de titulação apresenta uma região achatada,
correspondente à região de tamponamento, onde há pequenas variações de pH para adições fixas de ácido ou álcali. No
centro desta região, o ponto de inflexão da curva corresponde ao valor de pH em que há 50% de dissociação e [HA] = [A].
Entre os ácidos fracos, existe uma gradação de força ácida, revelada pelo valor de suas constantes de dissociação
(Tabela 1.1). Soluções de ácidos fracos diferentes, de mesma concentração, apresentam valores diferentes de pH,
dependendo da afinidade de cada base conjugada pelo próton: quanto maior o valor de K a, menor esta afinidade e mais
forte será o ácido fraco.
Suponham­se dois ácidos fracos, HA e HB, sendo a constante de dissociação (K a) de HA maior do que a de HB. A base
conjugada A tem, então, afinidade pelo próton menor do que a base conjugada B e o ácido HA é um ácido fraco mais forte
do que HB. Se estes ácidos forem dissolvidos em água, o ácido HA irá dissociar­se mais do que o ácido e o pH de sua
solução será menor.
Admita­se que ambas as soluções dos ácidos fracos HA e HB estejam em pH igual a 2 (isto pode ser conseguido
adicionando­se um ácido forte às duas soluções. Para proceder à titulação dos dois ácidos, a partir de pH 2, acrescenta­se
álcali, gradativamente, a estas soluções, o que provocará a dissociação dos ácidos. Após a adição de uma quantidade
conveniente de álcali, haverá uma situação em que 50% do ácido HA estará dissociado, mas menos do que 50% do ácido
HB encontrar­se­á dissociado. O valor do pH nesta situação poderia ser 5, por exemplo. Em outras palavras, em pH igual a
5 o ácido HA encontra­se 50% dissociado. Para obter situação análoga para o ácido HB há necessidade de adicionar mais
álcali, ou seja, o ácido HB vai apresentar­se 50% dissociado em um valor de pH mais alto. Graficamente, as duas curvas de
titulação terão a mesma forma, mas localizadas em alturas diferentes em relação à escala de pH (o eixo das ordenadas na
Figura 1.1 a).
O valor de pH em que um ácido fraco apresenta­se 50% dissociado equivale ao seu pK a. O pK a corresponde ao
cologaritmo da constante de dissociação do ácido (– log K a) e constitui, como esta, uma medida da sua força ácida: quanto
maior for o valor do pK a (ou menor o valor de K a) mais fraco será o ácido (Tabela 1.1). Ainda mais importante, o valor do
pK a revela a região de pH em que um ácido fraco apresenta seu maior poder tamponante.
 A equação de Henderson-Hasselbalch relaciona pH, constante de dissociação do ácido e as concentrações de ácido e base
conjugada
Considere­se a dissociação do ácido fraco HA:

HA ⇌ A + H +

E a constante de equilíbrio (K a) dessa reação:

Tomando em logaritmo a equação anterior, tem­se:

Substituindo­se as expressões – log [H +] e – log K a por pH e pK a, respectivamente, resulta:

Esta é a equação de Henderson­Hasselbalch, que nada mais é do que a equação da constante de equilíbrio de
dissociação de um ácido fraco tomada sob a forma logarítmica.
Em um determinado valor de pH, o ácido encontra­se 50% dissociado, [HA] = [A] e a razão [A]/[HA] vale 1, obtendo­
se:

pH = pK a

Verifica­se, pela equação de Henderson­Hasselbalch, que pK a é o valor de pH que provoca 50% de dissociação do
ácido. A equação define o pK a em bases operacionais, à semelhança do pH em relação à concentração de H + da solução.
De maneira genérica, esta equação pode ser escrita da seguinte maneira:

A equação de Henderson­Hasselbalch permite calcular, em qualquer pH, a razão entre as concentrações das espécies
doadoras e aceptoras de prótons para um sistema­tampão, desde que o pK a do ácido seja conhecido. Por exemplo, para o
tampão acetato pode­se calcular a razão das concentrações de ácido acético (H 3C– COOH) com pK a = 4,7 e acetato (H 3C–
COO –) em pH = 5,7:
 ou

No pH 5,7, portanto, haverá 10 vezes mais acetato do que ácido acético. No pH 3,7 ocorrerá o inverso. Generalizando,
em valores de pH inferiores ao pK a de um ácido fraco predomina a sua forma protonada (ácido conjugado) e, em valores de
pH maiores do que o pK a, predomina a forma desprotonada (base conjugada).
Para o tampão acetato, a faixa compreendida entre 3,7 e 5,7 (entre pH = pK a – 1 e pH = pK a + 1) corresponde à região
achatada da curva de titulação, isto é, à região de tamponamento (assinalada na Figura 1.2). Fora destes limites, a
concentração de ácido conjugado fica desprezível em relação à de base conjugada, ou vice­versa, e o sistema não se
comporta mais como tampão. Assim, em pH 6,7 tem­se:

Uma solução que contivesse inicialmente 101 moléculas de ácido acético apresentaria no pH = 6,7 uma única
molécula do ácido e 100 íons acetato. Neste pH, a solução não se comportaria mais como tampão, pois, com tão pequena
concentração de ácido, seria incapaz de resistir a adições de álcali.
As afirmativas sobre este exemplo são válidas para a imensa maioria dos sistemas­tampão: a melhor atuação do tampão
se dá em valores de pH próximos ao seu pK a (um caso excepcional encontra­se na Seção 1.4).
O ácido acético ilustra a regra geral para a escolha do ácido fraco com o qual se pretende preparar uma solução­tampão:
o ácido fraco constituirá um tampão apropriado se o valor de seu pK a estiver dentro do intervalo compreendido por uma
unidade abaixo e uma unidade acima do valor de pH que se quer manter constante.

A e䊅�ciência de um tampão depende de sua concentração

Além da proximidade do pH em que há 50% de dissociação (pK a), outro fator determinante da eficiência do tampão é a
sua concentração, que é a soma das concentrações do ácido e da base conjugada. O tampão mantém igual concentração em
qualquer valor de pH, pois, à medida que a concentração do ácido aumenta, a da base conjugada diminui, ou vice­versa.
Quanto maior a concentração de um tampão, maior a disponibilidade das espécies capazes de doar ou receber prótons: uma
solução 0,1 M de um ácido que esteja 50% dissociado será um tampão 10 vezes mais eficiente do que uma solução 0,01 M
do mesmo ácido na mesma condição.
Em resumo, a eficiência de um tampão é proporcional à sua concentração e é máxima no pH igual ao pK a de seu ácido
fraco (que pode ser medido por titulação). Na prática, o ácido fraco escolhido e um dos seus sais são dissolvidos em
concentrações iguais. Para preparar um tampão acetato 0,1 M a pH 4,7, dissolvem­se em 1 L de água 0,05 mols de ácido
acético e 0,05 mols de acetato de sódio. O mesmo resultado seria conseguido pela dissolução de 0,1 mols de ácido acético
e adição de álcali suficiente para elevar o pH até 4,7; quando o pH atingir este valor, e o volume for acertado para 1 L, a
composição da solução será idêntica ao caso anterior (50% do ácido e 50% da base conjugada).
Figura 1.2 Titulação de um ácido fraco — a região de tamponamento estende­se uma unidade abaixo e acima do pK a .

1.4 Tampões biológicos

Os seres vivos mantêm constante o seu pH interno
Os tampões biológicos são aqueles encontrados nos seres vivos. Na espécie humana, o pH do sangue é mantido muito
próximo de 7,4, embora não sejam muitos os ácidos fracos que apresentam valores de pK a em torno de 7,4. Os principais
responsáveis pela manutenção desse valor de pH são as proteínas, o tampão bicarbonato e o tampão fosfato.
O efeito tamponante das proteínas é devido aos grupos ionizáveis dos seus resíduos de aminoácidos, que são ácidos
fracos. Entretanto, os valores de pK a da maioria desses grupos são muito distantes de 7,4 (Tabela 2.1, no Capítulo 2),
tornando­os ineficazes como tampões neste pH. Os aminoácidos que apresentam um grupo com pK a compatível com o
tamponamento a pH fisiológico são a histidina e a cisteína. Adicionalmente, as proteínas exercem efeito tamponante
muito discreto no plasma, por estarem presentes em baixas concentrações — vale lembrar que a eficiência do tampão
depende de sua concentração. Sua importância no tamponamento celular é maior do que no plasmático, porque atingem
níveis mais elevados nas células. A exceção é a hemoglobina que é a responsável principal pela manutenção do pH
plasmático (Seção 3.3.1), juntamente com o tampão bicarbonato.
No caso do tampão bicarbonato, o ácido carbônico dissocia­se em bicarbonato e H +:

H 2CO 3 ⇌ HCO 3− + H +

O valor de seu pK a é 3,8, incompatível com o tamponamento fisiológico. O ácido carbônico apresenta, todavia, a
característica peculiar de estar em equilíbrio com o CO 2 dissolvido em água segundo a reação:

CO 2 + H 2O ⇌ H 2CO 3

No organismo humano, o CO 2 formado nos tecidos, como produto do metabolismo celular, difunde­se para o plasma e
para o interior das hemácias. Estas células contêm uma enzima, a anidrase carbônica, uma das enzimas mais eficientes que
se conhece, capaz de acelerar a reação de hidratação do CO 2 por cerca de 10 7 vezes — o CO 2 dissolvido é transformado
imediatamente em H 2CO 3, que se dissocia em HCO 3− e H +:

CO 2 + H 2O ⇌ H 2CO 3 ⇌ HCO 3− + H +

A constante de equilíbrio do sistema­tampão bicarbonato, incorporando­se a concentração de H 2O, por ser

praticamente constante, é:

O CO 2 (o anidrido do ácido carbônico) equivale ao “ácido conjugado” do tampão bicarbonato.

 A concentração de CO 2 dissolvido depende da pressão parcial de CO 2 (pCO 2) na atmosfera e, como somente 3% do gás
é dissolvido a 37ºC, esta função é expressa por 0,03 • pCO 2. Obtém­se:

A constante de equilíbrio do sistema­tampão bicarbonato a 37ºC pode ser calculada a partir da constante de equilíbrio
da reação de hidratação do CO 2 (3 × 10 −3M) e da constante de dissociação do ácido carbônico (2,7 × 10 −4M) — o valor da
nova constante é 8,1 × 10 −7M e o do novo pK a é 6,1. A equação de Henderson­Hasselbalch para este sistema­tampão torna­
se:

O CO 2 dissolvido no plasma está em contato com o CO 2 atmosférico através do espaço alveolar, permitindo um rápido
ajuste da concentração de H + quando esta tende a variar. O tampão bicarbonato constitui, por isto, um sistema aberto,
muito mais eficiente no controle do pH do que um sistema fechado. Realmente, supondo o sistema fechado, uma adição de
ácido forte (H +) faria com que a maior parte dos prótons combinasse com a base conjugada (HCO 3–), diminuindo sua
concentração e aumentando a concentração do ácido (CO 2). A razão [HCO 3–]/0,03 • pCO 2 ficaria muito diminuída, e o pH
assumiria um valor muito baixo. Como o sistema é aberto, a mesma adição de prótons faz diminuir a concentração de base
conjugada, mas não aumenta a concentração de ácido conjugado, já que a concentração de CO 2 ajusta­se rapidamente à
pressão parcial deste gás na atmosfera. A relação entre as concentrações de HCO 3– e CO 2, neste caso, diminui, porém muito
menos do que no caso do sistema fechado. Em outras palavras, no sistema fechado, a adição de ácido provoca uma queda
de pH muito maior do que no sistema aberto. O fato de o sistema bicarbonato ser um sistema aberto é que permite sua
eficácia na manutenção do pH plasmático.
No pH fisiológico (7,4), a proporção entre as concentrações de HCO 3– e CO 2 é de 20:1, mostrando que o sistema é mais
efetivo para resistir à acidificação do que à alcalinização. O estudo do funcionamento associado deste sistema­tampão com
a hemoglobina está descrito na Seção 3.3.3.
O tampão fosfato (H 2PO 4–/HPO 42–) tem pK a igual a 6,8, constituindo um tampão apropriado para valores de pH entre
5,8 e 7,8. No plasma, porém, a concentração deste tampão é muito baixa, tornando sua eficiência muito reduzida.
Intracelularmente (pH do citosol ≅ 7), sua concentração é maior e sua eficácia é considerável.

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