UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

CARRERA DE MEDICINA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PRÁCTICA 7: Streptococcus

Revisado: César Padilla Martínez, diciembre 2019

OBJETIVO:
1.- Identificar las infecciones por estreptococo.
2.- Utilizar los métodos diagnósticos para identificar estreptococos.
3.- Identificar métodos diagnósticos indirectos para infección e inflamación.

RESULTADO DEL APRENDIZAJE:

1.- Reconocer pruebas para caracterizar a los diferentes tipos de estreptococos
2.- Diagnosticar la faringoamigdalitis bacteriana aguda
3.- Interpretar ASTO y PCR

INTRODUCCIÓN

Fig. 1 Anatomía del tracto respiratorio, incluye las regiones de las vías aéreas superiores

El tracto respiratorio del hospedador humano tiene varios mecanismos de protección contra
las infecciones. Tales pueden ser anatómicos como los cornetes nasales, los reflejos de la tos el
estornudo y la deglución, e inclusive los relacionados a la membrana mucosa, los cilios del
revestimiento traqueal, los vellos nasales, la IgA secretora, y otras sustancias antibacterianas
inespecíficas como la lisozima.

Así mismo, la mucosa de las vías respiratorias superiores está colonizada por
microorganismos como Streptococcus, Neisseria sp. (Excepto Neisseria gonorrhoeae),
Staphylococcus, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Micoplasma, Prevotella, además
de levaduras como Candida albicans, virus como bacteriófagos (virus de bacterias), el adenovirus
y, virus del herpes simple.

En la actualidad se reconoce que hay dos especies bacterianas que causan infecciones del
tracto respiratorio superior: Streptococcus pyogenes y Neisseria gonorrhoeae. Mientras que las
causas virales suelen ser por Adenovirus, Virus Sincitial Respiratorio, Virus de la Influenza A y B, y
Virus de la Parainfluenza como los más prevalentes en Ecuador.

Los agentes patógenos bacterianos de las vías respiratorias inferiores clásicamente son
Streptococcus pneumoniae, Bordetella pertusis y Haemophilus influenzae, aunque casi cualquier
otro que pueda llegar a atravesar las barreras de la inmunidad innata puede ser el causante de una
infección pulmonar.
Género Streptococcus

Los Streptococcus son cocos grampositivos, anaerobios facultativos, catalasa negativos que
se disponen formando cadenas (strepto=cadena). Dichas bacterias son parte de la flora normal del
ser humano, principalmente del tracto respiratorio superior. En los medios de cultivo que tienen
sangre los Streptococcus tienen la capacidad de causar hemólisis o destrucción de eritrocitos en
diversos patrones. El tipo de hemólisis permite clasificar a los estreptococos en β-hemolíticos
(producen hemólisis total), α- hemolíticos (producen hemólisis parcial) y no hemolíticos
(estreptococos que no producen hemólisis). Además, los Streptococcus β-hemolíticos poseen en
su pared celular distintos tipos de polisacáridos específicos que permiten su clasificación en grupos
serológicos A, B, C, D, etc., denominados grupos de Lancefield.

Cuadro 1. Descripción de los tipos de hemólisis

Tipo de Descripción Ejemplo
hemólisis
Alfa (α) Hemólisis incompleta en agar
sangre, presenta un halo
verdoso alrededor, debido a la
lisis incompleta de eritrocitos y
por la generación de
biliverdina a partir de
hemoglobina

Beta (β) Hemólisis completa en agar

sangre, producen un halo
transparente por acción total
de las estreptolisinas O y/o S

Gamma (ϒ) No hay acción de

estreptolisinas, por lo tanto, no
producen halo de hemolisis
alguno

Streptococcus pyogenes:
Ésta bacteria es un Streptococcus β-hemolítico perteneciente al grupo A de la clasificación
de Lancefield (único representante del grupo A). Aunque no forma parte de la flora normal del
hombre, coloniza un 15–20% de la población, principalmente el aparato respiratorio de niños y
adolescentes. La infección se produce por transmisión de persona a persona a través de
secreciones respiratorias. S. pyogenes causa una amplia gama de infecciones, pero las infecciones
más frecuentes son las faringoamigdalitis y las infecciones de la piel como el impétigo, la erisipela,
y la escarlatina.

Los principales factores de virulencia de éstas bacterias son: la proteína F que media la
adherencia a las células epiteliales, la proteína M que es antifagocítica, y las varias enzimas y
hemolisinas que contribuyen a la invasión y la destrucción de los tejidos, entre ellas están la
estreptolisina O, la estreptolisina S, la estreptocinasa, la DNasa y la hialuronidasa.

Además, de manera interesante, las infecciones de orofaringe producidas por S. pyogenes

pueden inducir una respuesta inmunológica adquirida con producción de anticuerpos contra las
estreptolisinas y contra las proteínas M. Dichos anticuerpos pueden producir una reacción cruzada
sobre proteínas del hospedador. En especial, los anticuerpos contra la proteína M pueden señalizar
a las células del endocardio, de las membranas sinoviales o inducir la acumulación de complejos
inmunes en el riñón. Esa señalización activa al sistema inmunológico que destruye a dichos
órganos produciendo las entidades clínicas conocidas como Fiebre reumática y Glomerulonefritis
posinfecciosa. Es de notar entonces, que la bacteria no es la causante de esos cuadros
clínicos, pero sí lo es la reacción autoinmune inducida en el hospedador.

Streptococcus agalactiae
Éste es un Streptococcus β-hemolítico del grupo B. Causa neumonía y meningitis en
neonatos con bacteriemia sistémica ocasional. Ellos también pueden colonizar los intestinos y el
tracto reproductor femenino; que en el caso de las mujeres embarazadas puede incrementar el
riesgo de ruptura prematura de membranas y la transmisión al infante.

Enterococcus
Las bacterias del género Enterococcus son genéticamente distantes a los Streptococcus,
pero también son cocos grampositivos catalasa negativos. Éstas bacterias forman parte de la
microbiota normal de ser humano, pero pueden ocasionar infecciones sistémicas. Son factores de
riesgo para su infección el uso prolongado de antibióticos, el uso de sondas vesicales y la
hospitalización prolongada.

Streptococcus pneumoniae
También conocido como neumococo es un Streptococcus α- hemolítico En la tinción Gram
pueden aparecer como diplococos grampositivos alargados y que presentan una cápsula de
polisacárido que permite tipificarlos con antisueros específicos. Habitan las vías respiratorias
superiores en el 5-40% de individuos sanos, pero pueden causar neumonía, otitis, bronquitis,
bacteriemia, meningitis y otros procesos infecciosos. Los neumococos producen enfermedad por
su capacidad para multiplicarse en los tejidos, la virulencia del germen depende de la función de la
cápsula que evita o retarda la ingestión por las células fagocitarias.

DIAGNÓSTICO
Cuando un paciente presenta un cuadro clínico sugerente de una infección por
Streptococcus, se debe tomar una muestra para su cultivo. Sin embargo, hay que tomar en cuenta
que Streptococus pyogenes es muy susceptible a ser inhibido por la microbiota normal, mientras
que Streptococcus pneumoniae acumula muchas toxinas en el medio de cultivo y puede llegar a
morir durante su crecimiento.

La muestra del cultivo de orofaringe inicia con el lavado de dientes sin enjuague bucal. Se
toma la muestra frotando faringe y las amígdalas con un hisopo de algodón, dacrón o alginato, si el
hisopo permanece húmedo, no es necesario tomar precaución alguna si se cultiva dentro de las 4
horas después de la obtención de la muestra. También se puede solicitar que la muestra sea
tomada en el laboratorio por personal entrenado para ello.
Si se sospecha de un proceso autoinmune en cambio se debe solicitar la cuantificación de los
Anticuerpos Anti-Estreptolisina “O” cuyos acrónimos son: ASTO, ASLO o ASO.

MATERIALES REQUERIDOS
- Centrífuga de 2.500 r.p.m.
- Mezclador,
- Jeringuillas de 5 ml.
- Tubo tapa roja de 10 ml de capacidad
- Tubo pequeño de 5 ml de capacidad
- Láminas oscuras con celdillas de 18 mm de diámetro
- Pipetas automáticas graduables
- Puntas amarillas,
- Torundas,
- Torniquete
- Palillos,
- Reactivo de ASTO por método látex
- Controles de sueros humanos estabilizados (positivo – negativo)
- Reactivo de P.C.R. por método látex
- Un dispositivo de diagnóstico STREP A en formato Tira.
- Escobillones estériles
- Un tubo de extracción con su respectiva tapa gotero
 - Reactivo de extracción A ( Nitrato de Sodio 2M)
- Reactivo de extracción B ( Ácido Acético 0.4M)
- Reloj

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
- Los estudiantes serán agrupados en número de más o menos 6 estudiantes
- Realizaran toma de muestra de secreción faríngea y extracción de sangre
- Observarán ó realizarán las actividades del Cuadro 2.
-
Cuadro 2. Métodos de Diagnóstico, Streptococcus

Método de diagnóstico Descripción Ejemplo

Tinción Gram Permite identificar la morfología celular
que en este caso son cocos
grampositivos dispuestos en pares o
cadenas, la forma de las células
individuales varían desde las que se
asemejan a diplococos hasta las que
son cocobacilares o corineformes.

Cultivos Se utiliza agar sangre de cordero,

donde se presentan como colonias >
0.5 mm de diámetro, translúcidas,
blanquecinas o grisáceas, lisas
brillantes, de bordes completos, con
halo de hemólisis completa.

Catalasa Una reacción negativa, aumenta la

posibilidad de ser un estreptococo,
descartando así a los Staphylococcus.

Prueba de Bacitracina Ésta prueba ayuda a identificar a

(Disco Taxo A) Streptococcus pyogenes de los otros,
por el principio de que todas estas
bacterias son sensibles a bacitracina, y
por ende en agar sangre veremos un
halo sin bacterias alrededor del disco
con el antibiótico (Disco A, en la
imagen).
Test de CAMP En agar sangre hacemos dos inóculos
(Christie, Atkins, en forma de T, en la horizontal de la T
Munch-Peterson Test) inocularemos Staphylococcus
productor de β-lisina y en la vertical
Streptococcus agalactiae, si se forma
una flecha de beta hemólisis
confirmamos el diagnóstico de
Streptococcus beta hemolítico del
grupo B, es decir, se produjo la
proteína extracelular difusible( factor
CAMP)
 Prueba PYR Se toman cultivos puros y se hace una
(Hidrólisis de L-pirrolidonil- suspensión en 50 uL de solución salina
2-naftilamida) y se les agrega discos con reactivo
pirrolidonil-beta-naftilamida, si el disco
se tiñe de rojo-rosa es positivo si es
blanco es negativo, ayuda a identificar
S.pyogenes y Enterococcus ambos son
positivos a ésta prueba.
Solubilidad en bilis- Algunos microorganismos se lisan en
esculina. presencia de bilis. Se inocula un caldo
nutritivo sin glucosa y con pH alrededor
de 7 con el microorganismo durante 24
h y se le añade a la solución de bilis al
10% (generalmente desoxicolato de
sodio).Se incuba a 35-37°C y si antes
de 3 h se produce un aclaramiento en
el contenido del tubo se identifica
Enterococcus.
Prueba de Se evidencia la sensibilidad que tiene
Susceptibilidad a el Streptococcus pneumoniae a la
Optoquina optoquina (cloruro de etilhidrocupreina,
Disco P, en la imagen) mientras que los
otros estreptococos alfa hemolíticos
son resistentes a la optoquina.

PRUEBA DE DIAGNÓSTICO INDIRECTAS (SEROLÓGICO)

ANTIESTREPTOLISINA O (ASTO)

La prueba mide la respuesta de anticuerpos generados por la presencia de la estreptolisina

O del Streptococcus pyogenes, el reporte puede ser cualitativo, semicuantitativo y cuantitativo
dependiendo del método utilizado. En la práctica realizaremos aglutinación con látex.

Procedimiento cualitativo
- Utilizando una pipeta, se dispensa una gota de suero del paciente (0,05 ml) en un anillo de
la lámina, se utiliza suero
- Mezclar y homogenizar el reactivo de ASTO y agregar una gota junto al suero
- Mezclar con un palillo las dos gotas y extenderlas en toda la superficie del círculo
- Hacer rotar la lámina en forma de 8 horizontal o ponerla sobre el rotor durante 2 minutos
- Observar si se producen grumos o partículas grandes o gruesas; si no existen las
partículas quiere decir que no hay aglutinación.

Falsos positivos
Por el uso de sueros hemolizados, contaminados o lipémicos
Exceso de tiempo de reacción por desecación de la muestra

Falsos negativos
Cuando hay exceso de antígeno no se produce la aglutinación (fenómeno de prozona) si hay
sospecha clínica se puede repetir el procedimiento con dilución del suero 1:10

PROTEINA C REACTIVA (PCR)

La proteína C reactiva se activa ante cualquier evento inflamatorio: traumas, infecciones,

etc. Se utiliza para determinar si ante una prueba positiva a ASTO y en ausencia de otro proceso
inflamatorio, se está dando un proceso autoinmune como lo es la fiebre reumática.
Fundamento de la técnica

El método se fundamenta en una reacción de aglutinación de una suspensión de partículas

de látex polietileno sensibilizadas con anticuerpos altamente purificados de anti proteína C-reactiva.
La aglutinación es visible a una concentración de PCR en suero igual o superior a 6mg/L
Existe también los métodos semicuantitativos y cuantitativos el primero por diluciones
seriadas del suero que se investiga en 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y el segundo se realiza por nefelometría,
ELISA, etc. y se reporta en mg por ml.

PRUEBA RÁPIDA DE DETECCIÓN DE ANTÍGENOS

La prueba rápida STREP A permite mediante un ensayo inmunocromatográfico la
determinación visual cualitativa en un solo paso de la presencia de antígeno de Streptococcus β-
hemolítico del grupo A en secreciones faríngeas

Procedimiento
1. Agregue 4 gotas del reactivo A (de color rojo) y 4 gotas del reactivo B (incoloro) a cada tubo
de extracción y mezclar.
2. Inmediatamente introduzca el escobillón que contiene la muestra en el tubo y agite
vigorosamente el escobillón 10 veces en el tubo.
3. Deje el escobillón en el tubo por 1 minuto, entonces presione el escobillón contra el lado
interno del tubo para exprimir la parte inferior mientras se va retirando el escobillón,
deseche el escobillón.
4. Extraiga la tira reactiva del empaque e identifíquela de acuerdo a los procedimientos de su
laboratorio.
5. Con las flechas apuntando hacia la muestra, coloque la tira verticalmente en la solución de
muestra extractada y empiece a cronometrar. Deje la tira en el tubo de extracción
6. Espere 5 minutos e intérprete los resultados.
7. No interpretar los resultados después de los 10 minutos.

4.- AUTOEVALUACION E INVESTIGACION

 ¿Cuáles son las complicaciones más graves de la infección por Streptococcus pyogenes?
 ¿Cuál es el agente bacteriano más frecuente causal de faringitis?
 ¿Causas de falsos positivos de las pruebas de aglutinación?
 Describa el fundamento de la prueba rápida de identificación de estreptococo pyogenes

5.-BIBLIOGRAFÍA.-

1. Jawetz, Melnick. Adelberg. (2007) Medical Microbiology, 24th Edition, McGraw-Hill.

2. Murray, P., Rosenthal, K., & Pfaller, M. (2013). Microbiología Médica. Barcelona: ELSEVIER.
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Facultad de Ciencias Médicas
Carrera de Medicina

PRE-REQUISITOS DE MICROBIOLOGIA STREPTOCOCCUS

NOMBRE: DOCENTE:

FECHA:
PARALELO: GRUPO:

PREGUNTA 1.

PREGUNTA 2
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POST-REQUISITOS DE MICROBIOLOGIA STREPTOCOCCUS

NOMBRE: DOCENTE:

FECHA: PARALELO: GRUPO:

PREGUNTA 1.

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