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    Antibiograma Final

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    Daniel Zanabria Jordan
    El documento describe los métodos para realizar un antibiograma, incluyendo el método de dilución y el método de difusión en disco de Kirby-Bauer. El antibiograma determina la susceptibilidad de los microorganismos a varios agentes antimicrobianos mediante la medición de las zonas de inhibición del crecimiento bacteriano. Los resultados permiten clasificar a los microorganismos como sensibles, intermedios o resistentes a cada antibiótico.

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    Antibiograma Final

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    Daniel Zanabria Jordan
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    El documento describe los métodos para realizar un antibiograma, incluyendo el método de dilución y el método de difusión en disco de Kirby-Bauer. El antibiograma determina la susceptibilidad de los microorganismos a varios agentes antimicrobianos mediante la medición de las zonas de inhibición del crecimiento bacteriano. Los resultados permiten clasificar a los microorganismos como sensibles, intermedios o resistentes a cada antibiótico.

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    Antibiograma Final

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    El documento describe los métodos para realizar un antibiograma, incluyendo el método de dilución y el método de difusión en disco de Kirby-Bauer. El antibiograma determina la susceptibilidad de los microorganismos a varios agentes antimicrobianos mediante la medición de las zonas de inhibición del crecimiento bacteriano. Los resultados permiten clasificar a los microorganismos como sensibles, intermedios o resistentes a cada antibiótico.

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    Antibiograma

    Antibiograma: son mtodos in Vitro que determinan la susceptibilidad de los microorganismos a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio especfica y estandarizada.

    SENSIBLE

    RESISTENTE

    OBJETIVOS

    MTODOS - ANTIBIOGRAMA

    Interpretacin del Antibiograma


    La interpretacin de los resultados obtenidos permite clasificar a los microorganismos en categoras clnicas: sensibles, intermedios o resistentes.
    C.I.M: concentracin mnima inhibitoria representa la mnima cantidad de antimicrobiano capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo.
    C.M.B: concentracin mnima bactericida concentracin mnima que mata el microorganismo.

    Utilidad de Antibiograma
    Terapia Antimicrobiana dirigida Conocer el fenotipo de sensibilidad de un microorganismo. Perfil epidemiolgico institucional Seguimiento y anlisis de brotes

    Interpretacin
    1. 2. Identificacin del microorganismo (a nivel de especie) Anlisis de fenotipo: susceptibilidad / Resistencia 1. Grupos (familias) de agentes antimicrobianos 2. Indicadores de resistencia a los antimicrobianos Definir Fenotipo 1. Fenotipos comunes 2. Fenotipos inusuales 3. Fenotipos "Imposibles Deducir mecanismos bioqumicos de resistencia Importancia clnica de la resistencia inferirse Redefinir Categoras de identificacin clnica

    3.

    4. 5. 6.

    MTODO DE DILUCION
    Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia de concentraciones decrecientes de un mismo antibitico. Se observa el crecimiento de los microorganismos mediante la aparicin de turbidez

    Antibiograma por dilucin

    Tcnica de referencia en la mayora de los estudios clnicos de susceptibilidad a antimicrobianos. Entrega un resultado cuantitativo, ya que permite determinar la concentracin inhibitoria mnima (CIM). Se puede realizar en medio lquido (dilucin en caldo) o en medio slido (dilucin en agar). Mtodo complejo y de alto costo.

    Lectura del CIM

    Dilucin seriada en caldo

    CIM

    Mtodo de Difusin en Disco (Baeur-Kirby)


    Es el mas difundido. Prueba la inhibicin o resistencia de los microorganismos, enfrentndolos con los medicamentos que se encuentran impregnados en pequeos discos.

    Antibiograma por difusin (Tcnica de Kirby-Bauer)

    Es el mtodo ms usado Es prctico y sencillo de realizar e implementar Permite analizar un gran nmero de antibiticos al mismo tiempo y bajo las mismas condiciones

    Entrega un resultado cualitativo (bacteria sensible o resistente)

    Antibiograma por difusin (Tcnica de Kirby-Bauer)

    Anlisis de varios antibiticos en un mismo ensayo

    Resistente (No hay halo de inhibicin)

    Sensible (Presencia de halos de inhibicin)

    Medio de cultivo utilizado


    Mueller Hinton Su reproducibilidad aceptable. Baja concentracin de inhibidores, condicin crtica para evaluar sulfonamidas, trimetoprim y tetraciclina. El crecimiento satisfactorio de patgenos no exigentes. Existir ya gran experiencia en estudios de susceptibilidad.

    Factores que influyen en el Agar


    pH: El rango de pH va de 7,2 a 7,4. variacin de cationes divalentes:
    Ca y Mg: Afectan los halos de inhibicin para aminoglucsidos y tetraciclinas en Pseudomonas aeruginosa.

    Profundidad del Agar: La profundidad recomendada de la capa de agar es de 3 a 5 mm.

    Factores que afectan la actividad antibacteriana in vitro

    pH del medio de cultivo: algunos antibiticos son activos a pH cido (nitrofurantona) y otros lo son a pH alcalino (aminoglucsidos). Componentes del medio de cultivo: pueden antagonizar al antibitico (extracto de levadura antagoniza a sulfonamidas). Estabilidad del medicamento: algunos antibiticos se inactivan a la temperatura de cultivo (clortetraciclina, en menor grado penicilina) Tamao del inculo: si hay muchas bacterias, la susceptibilidad es menor y pueden aparecer mutantes resistentes.

    Tiempo de incubacin: si es muy breve los m.o. no mueren; si es muy largo, pueden aparecer mutantes resistentes o inactivarse el medicamento.

    PREPARACIN DEL INCULO Y ESTANDARIZACIN DE LA SUSPENSIN

    En ambos mtodos, la turbidez de la suspensin debe ser estandarizada al estndar 0,5 de McFarland (que corresponde a aproximadamente 1,5 X 10 -8 CFU/ml).

    Preparacin del Inculo


    Se prepara el inculo con ajuste a la turbidez McFarland 0,5 que corresponde aun dimetro de1.5 x10 UFC/ML, directo en caldo de colonias frescas en agar no selectivo.

    SUSPENSIN DIRECTA DE LAS COLONIAS


    Se trabaja con cultivos jvenes.

    En esta tcnica se estandariza el inculo al mismo tiempo que se


    prepara la suspensin.
    3 A 5 COLONIAS SS CALDO COMN

    AJUSTAR TURBIDEZ 0,5 ESCALA DE McFARLAND

    ESTABILIZAR 15 MIN.

    FASE LOGARTMICA DE CRECIMIENTO


    Se usa para la mayora de microorganismos de rpido crecimiento.

    3 A 5 COLONIAS

    SS CALDO COMN

    INCUBACIN A 35 0 C 2-6 HORAS

    AJUSTAR TURBIDEZ 0,5 ESCALA DE McFARLAND

    Inoculacin de la placa
    Con un hisopo estril en tres direcciones inocule toda la placa (giros de 60).

    Aplicacin de sensidiscos
    separacin: los discos deben de estar separados24 mm (del centro de un sensidisco al otro ms cercano). Cantidad: 12 unidades en placas de 150mm y 5 unidades en placas se 100mm.

    MTODO AUTOMTICO

    Medicin de los halos


    Se usa una regla y se mide el dimetro del halo de inhibicin partiendo de desde donde est el disco de antibitico hasta donde se inhibi el crecimiento. La longitud obtenida despus se compararn con estndares que nos dirn si el

    Lectura e interpretacin de los resultados


    Categoras de interpretaron: Sensible: El
    microorganismo presenta un gran rea de inhibicin causada por el frmaco. 95% xito

    Intermedio: Se presenta
    un halo de inhibicin mas reducido.

    Antibitico Ampicilina Amikacina Sulfisoxasol Gentamicina Cloranfenicol Ceftriaxona Ciprofloxacin a Tetraciclina Acido Nalidixico Estrptomicina anamicina Trimetroprim/ Sulfametoxas ol

    Resistente 13 14 12 12 12 12 15 14 13 11 13

    Intermedia 14 - 16 15 16 13 - 16 13 14 13 - 17 14 20 16 - 20 15 - 18 14 18 12 14 14 - 17

    Susceptible 17 17 17 15 18 21 21 19 19 15 18

    10

    11 15

    16

    Mtodo de E-test:
    Consiste en aplicar sobre un medio de cultivo, donde se encuentra el microorganismo a ensayar, tiras plsticas que llevan incluidas un gradiente de concentracin de un determinado ATB. Luego se incuba adecuadamente y se observa la formacin de una elipse de inhibicin de crecimiento.

    Mtodo Automatizado:

    Este mtodo se basa en micro diluciones sobre micro tubos. El crecimiento bacteriano se va a observar por la turbidez o fluorescencia de los micro tubos.
    Es til para examinar una gran cantidad de muestras

    bibliografia
    Guia de suceptibilidad antimicrobiana de laboratorio de microbiologia-HNCH.

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