Tecnicas Analisis Quimico PDF

Master en Ingeniera y Gestin Medioambiental 2007/2008
Mdulo: Contaminacin Atmosfrica
TCNICAS ANALTICAS
AUTOR: PABLO JOS MOROS GARCA
: Quedan reservados todos los derechos. (Ley de Propiedad Intelectual del 17 de noviembre de 1987 y Reales Decretos).
Documentacin elaborada por el autor/a para EOI.
Prohibida la reproduccin total o parcial sin autorizacin escrita de EOI.
ndice
1. INTRODUCCIN ...................................................................................................................... 3
2. TIPOS DE TCNICAS. MTODOS Y PROCEDIMIENTOS. ............................................. 4
3. PARMETROS DE CALIDAD DE UN MTODO ANALTICO........................................ 7
4. TCNICAS DE ANLISIS QUMICO.................................................................................... 9
5. TCNICAS DE ANLISIS MICROBIOLGICO............................................................... 29
6. TCNICAS DE ANLISIS TOXICOLGICO .................................................................... 33
7. TCNICAS DE ANLISIS BIOLGICO............................................................................. 37
8. BIBLIOGRAFA ...................................................................................................................... 40
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1. INTRODUCCIN.
Podra afirmarse que una de las principales caractersticas del estudio de la Contaminacin Ambiental
es su interdisciplinaridad. Se trata de un terreno en el que casi todas las ciencias, tanto naturales como
sociales, se interrelacionan y complementan contribuyendo a su desarrollo conceptual y metodolgico.
Dentro de los mtodos de estudio, las tcnicas de anlisis de los contaminantes, y de sus efectos, desempean un importante papel.
Descubrir los diferentes elementos que afectan a un sistema contaminado (lo que correspondera al
concepto clsico de anlisis tan propio de las ciencias qumicas), establecer la forma en que tales
componentes interactan, y conocer el modo en que el sistema responde ante la alteracin (cuestiones
ms caractersticas de la visin sistmica de las ciencias biolgicas), son puntos clave para abordar
los problemas de contaminacin ambiental, tanto en lo relativo a la prevencin como al diagnstico, la
correccin y la remediacin.
El gran desarrollo tcnico de las ltimas dcadas ha suministrado herramientas cada vez ms poderosas de anlisis, y prediccin. Gracias a ellas podemos detectar compuestos xenobiticos en concentraciones de partes por trilln, contar partculas de apenas unos micrmetros de tamao, o identificar
cepas microbianas con rapidez y fiabilidad. Ahora bien, es necesario distinguir entre aquellas tcnicas
empleadas en la investigacin cientfica, y aquellas otras que, de forma cotidiana, son utilizadas en los
laboratorios medioambientales para controlar la contaminacin. En esta distincin entran en juego dos
poderosos factores estrechamente ligados: los normativos y los econmicos.
En los ltimos 25 aos los pases ms desarrollados, y especialmente los pertenecientes a la UE, a
travs de estamentos legislativos nacionales, y supranacionales, han producido abundante normativa
ambiental. Parte de esa normativa ha ido dirigida al control de la contaminacin, tanto en los medios
receptores como en las fuentes emisoras. Para ello indican, generalmente, una serie de parmetros de
control, las tcnicas a emplear en su evaluacin, y los valores de referencia que se deben considerar
aceptables. La forma en que las diferentes normas tratan estos aspectos es muy variable: unas sealan
parmetros con valores de referencia, en ocasiones difcilmente alcanzables por las tcnicas de anlisis
descritas, otras proporciona valiosos detalles en cuanto a metodologa y parmetros de control de
calidad a cumplir, y por ltimo las hay tan abiertas a la libre interpretacin que el xito de su implantacin queda en manos de la voluntad de las administraciones locales. La lentitud inherente a todo
proceso legislativo, junto con la inercia de permanencia de las normas una vez incorporadas al ordenamiento jurdico, hacen que los avances tcnicos en materia de anlisis se introduzcan en las leyes,
por lo general, de manera muy tarda.
Del lado econmico nos encontramos con los intereses empresariales, energticos, urbansticos, industriales, e incluso en ocasiones de los propios Gobiernos, que ven con recelo toda normativa ambiental
a la que deben someter sus actividades, y a la que suelen considerar un recorte a la libertad de mercado. Esta concepcin se traduce, la ms de las veces, en destinar a labores de seguimiento y evaluacin
de contaminantes la menor cantidad de dinero posible, prefiriendo hacer slo lo imprescindible para
no situarse al margen de la ley.
Por tanto nos encontramos de un lado con una evolucin sin precedentes en tecnologas de investigacin de contaminantes, y por otro con un marco poltico y econmico caracterizado por la lentitud en
un caso, y por la primaca de la mnima inversin posible en el control cotidiano de fuentes, medios, y
efectos, en el otro. Como consecuencia, el grupo de tcnicas para anlisis de contaminantes y sus
efectos a las que, normativamente, debemos ceirnos representa tan slo una parte de la totalidad que
nos ofrece el desarrollo cientfico y tcnico.
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2. TIPOS DE TCNICAS. MTODOS Y PROCEDMIENTOS.

Atendiendo a los parmetros de control incluidos en las normas legales actualmente en vigor, las tcnicas de de anlisis pueden clasificarse en cuatro grupos: Qumicas, Microbiolgicas, Toxicolgicas, y
Biolgicas.
TIPOS DE TCNICAS
Qumicas
Atmsfera
Toxicolgicas
Biolgicas
Directiva 2000/60/CE.
Directiva Marco.
Ley 10 CAM, y
anlogas en otras
CCAA. Vertidos a la
red
Directiva
2000/60/CE. Directiva Marco.
Decreto 833/1975.Proteccin de
ambiente atmosfrico.
R.D. 1613/1985. Calidad del aire
(SO2 y partculas)
R.D. 646/1991. Emisin de
contaminantes de grandes instalaciones de combustin.
R.D. 1073/2002. Aire ambiente
(SO2, NOX, partculas, Pb, benceno, CO).
R.D. 117/2003. Limitacin de
COVs.
R.D. 653/2003. Incineracin de
residuos.
Directiva 2000/60/CE. Directiva
Marco.
Decisin 2455/2001/CE. Sustancias prioritarias.
Agua
Microbiolgicas
R.D. 849/1986. Reglamento del

Dominio Pblico Hidrulico.
R.D. 734/1988. Aguas de bao.
R.D. 995/2000. Sustancias listas I
y II.
R.D.140/2003. Aguas de consumo
R.D. 865/2003. Legionella.
R.D. 606/2003. Vertidos.
Orden MAM/1873/2004. Modelos de solicitud de vertidos.
.
Ley 10 CAM, y anlogas en
otras CCAA. Vertidos a la red.
R.D. 734/1988. Aguas

de bao.
R.D. 865/2003. Legionella
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TIPOS DE TCNICAS
Qumicas
Suelo
Residuos
Microbiolgicas
Toxicolgicas
R.D.9/2005. Suelos contaminados.
R.D.9/2005. Suelos
contaminados.
Orden 13/10/1989. Caracterizacin de residuos peligrosos.

R.D. 1310/1990. Lodos de depuradora.
R.D. 363/1995. Clasificacin,
etiquetado y envasado de sustancias peligrosas.
R.D. 952/1997. Constituyentes de
residuos peligrosos.
Orden 13/10/1989.
Caracterizacin
de
R.D.
363/1995.
Clasificacin, etiquetado y envasado de
sustancias peligrosas.
R.D.
952/1997.
Constituyentes
de
Biolgicas
Decisin 2003/33/CE. Aceptacin

de residuos en vertederos.
A parte de las peculiaridades intrnsecas a cada uno, las principales caractersticas de estos grupos
son:
Tcnicas qumicas:
-
Tcnicas microbiolgicas:
-
Son los que estn ms arraigadas, tanto en su implantacin prctica como en la legislacin, al ser las ms antiguos.
Es ms sencillo evaluar en ellas parmetros de control de calidad (lmites de cuantificacin, incertidumbres, exactitud, precisin), debido a que no estn directamente
influenciadas por la variabilidad inherente a la materia viva.
Son, en general, las ms rpidos para evaluar las caractersticas de un efluente o de
un medio receptor.
Se encuentran limitadas a contaminantes biolgicos, y a su presencia en efluentes y

en medios receptores.
Tcnicas toxicolgicas:
-
En especial las llamadas ecotoxicolgicas, permiten prever la reaccin del componente bitico de los ecosistemas ante la contaminacin, si bien suelen restringirse a
determinados niveles de organizacin biolgica, a determinados eslabones de las
cadenas trficas, y a reacciones in Vitro.
Son ms lentas, en general, que los qumicas.
Requieren, en general, de una infraestructura muy diferente a la de las qumicos, lo
que les hace con frecuencia ms costosas
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Tcnicas biolgicas:
-
Tienen en comn con las toxicolgicas la lentitud, pero a diferencia de estas establecen la respuesta de los ecosistemas in vivo, y abarcan un significativo nmero
de elementos biticos.
Son menos costosas en infraestructuras que las anteriores, pero requieren, en general, de personal con un mayor nivel de cualificacin.
Cualquier tcnica tiene por objeto la determinacin, cuantitativa o cualitativa, de un parmetro (un
analito, un organismo, una respuesta biolgica), mediante equipos e instrumentos, aprovechando alguna propiedad fsica, qumica, o biolgica, de la materia. As, las tcnicas espectroscpicas se basan
en las interacciones posibles que se dan entre la radicacin electromagntica y la materia inerte; las
tcnicas microbiolgicas de cultivo aprovechan la capacidad de muchas bacterias para crecer in
vitro formando colonias, etc.
La aplicacin concreta de las diferentes tcnicas se lleva a cabo mediante MTODOS DE ENSAYO.
El mtodo tiene un carcter menos genrico que la tcnica, y especifica la forma en que sta se aplica
para la determinacin de un parmetro en una matriz y bajo unas condiciones concretas. Actualmente
se dispone de un gran nmero de mtodos de ensayo normalizados, redactados y editados por entidades de reconocida solvencia ( United State Enviromental Protection Agency (USEPA), International
Standaritation Organization (ISO); etc). En ellos se indica, entre otros: el mbito de aplicacin del
mtodo, la manera en que se debe realizar el ensayo, los medios instrumentales, reactivos y fungibles
necesarios, y la forma en que se deben realizar los clculos y expresar los resultados.
Un laboratorio puede realizar sus ensayos de dos maneras diferentes:
-
Adaptndose a un mtodo normalizado, lo que implica asumir y seguir punto por

punto lo que indique la norma, sin desviarse de ella.
Elaborando un PROCEDIMIENTO INTERNO. El procedimiento se confecciona a

partir de diversas fuentes: mtodos normalizados, bibliografa cientfica, experiencia
propia, etc).
Optar por una u otra opcin tiene una gran importancia de cara a validar un mtodo de ensayo. Por
validacin se entiende el proceso que permite demostrar si los resultados obtenidos por un mtodo son
fiables, reproducibles y permiten utilizarlos para lograr un objetivo dado. Cuando para poner a punto
un ensayo elige por seguir un mtodo normalizado, el trabajo de validacin suele ser menor que si se
opta por un procedimiento interno, pero tambin suele limitar el rango de aplicacin del ensayo. Con
todo, la tendencia actual, marcada por las nuevas legislaciones y por los organismos de acreditacin,
es la puesta a punto de tcnicas mediante la incorporacin de una norma en lugar de por procedimiento interno.
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3. PARMETROS DE CALIDAD DE UN MTODO ANALTICO.

Los parmetros de calidad de un mtodo analtico nos permiten conocer si resulta o no adecuado
para la resolucin de un problema. Los principales de estos parmetros son:
-
La exactitud.
La precisin.
La sensibilidad.
El lmite de deteccin.
El lmite de cuantificacin.
Intervalo de linealidad.
La incertidumbre.
La selectividad o especificidad.
La exactitud es el grado de concordancia entre un resultado obtenido experimentalmente y el valor

real. Ese resultado puede ser el de una medida individual o el de la media de una serie de medidas
realizadas sobre un nmero n de alcuotas idnticas de una misma muestra.
La exactitud puede cuantificarse mediante el error absoluto (Ea) o mediante el error relativo (Er):
Ea = (+) x
Er = (+)Ea/x
Dnde es la media de las medidas, y X el valor verdadero.
En funcin del error relativo se pueden considerar tres tipos de mtodos de anlisis qumicos:
Veraz, si Er < 1%
Moderadamente veraz, si Er est entre el 1% y el 5%
Poco veraz, si Er > 5%
La precisin mide el grado de dispersin que presenta una serie de resultados obtenidos con replicados de la misma muestra. Cuanto mayor es la precisin de un mtodo, mayor ser su reproducibilidad:
cuando se repita el anlisis en momentos, e incluso en laboratorios, distintos, se obtendrn siempre
resultados similares.
La forma matemtica de expresar la precisin es el coeficiente de variacin (CV), que es el cociente
entre la desviacin normal de una serie de medidas (s) y su media () expresado en %:
CV (%) = (s/).100
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La sensibilidad de un mtodo analtico es la relacin entre la variacin de la seal analtica medida y

la variacin de la concentracin del analito que la provoca:
S = x/C
Dnde:
x es el incremento de la seal
C es el incremento de la concentracin del analito
El lmite de deteccin (LD) es la concentracin ms baja de analito que puede detectarse aunque no
cuantificarse con exactitud. Formalmente se define como la cantidad mnima de analito que origina
una seal analtica (XLD) estadsticamente distinta a la generada por el blanco (B) . Se considera estadsticamente distinta si supera tres veces la desviacin estndar de la seal del blanco:
XLD = B + 3sB
El lmite de cuantificacin (LC) es la concentracin ms baja de analito que puede cuantificarse con
exactitud. Numricamente es la concentracin mnima de analito que origina una seal analtica (XLD)
diez veces superior a la generada por el blanco (B) . Se considera el lmite inferior del rango lineal
del mtodo, esto es, del intervalo de concentraciones donde el mtodo es aplicable:
XLD = B + 10sB
El intervalo de linealidad es el rango de concentraciones del analito en el que el mtodo es aplicable,
esto es, en el que la relacin concentracin/seal es ajustable a la ecuacin de una recta. El lmite
inferior de este rango viene dado por el lmite de cuantificacin.
La incertidumbre del mtodo marca el intervalo de valores dentro del cual se espera encontrar el
valor verdadero de la magnitud medida. Se tratara del rango en el que, con una probabilidad determinada, se encuentra el valor real del analito. Por ejemplo, una incertidumbre del 10% en el anlisis de
partculas en emisin mediante un mtodo gravimtrico nos indica que el resultado real de partculas
est entre el 10% por arriba y el 10% por debajo de la pesada obtenida. As, si el valor de la pesada es
de 100 mg/filtro, el valor real de partculas estar comprendido entre 90 mg/filtro y 110 mg/filtro.
La selectividad o especificidad es la capacidad de un mtodo para originar resultados que slo dependan de la cantidad de analito presente en la muestra. Se encuentra relacionada con las interferencias que puedan producir los diferentes componentes de la matriz de la muestra: cuanto menos influyan en la medida ms selectivo ser el mtodo.
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4. TCNICAS DE ANLISIS QUMICO.

4.1. Pretratamientos.
Con frecuencia el analito no se encuentra en la muestra en un estado adecuado para su determinacin.
La mayora de las tcnicas analticas necesitan que el analito se encuentre disuelto en un solvente
adecuado, y que la concentracin de la especie a determinar est dentro de unos lmites; por lo que, en
general, la medida no se puede realizar directamente sobre la muestra tal cual. La complejidad y el
nmero de operaciones que se deben realizar en esta parte del proceso de anlisis dependen de la naturaleza de la muestra (gas, lquido, o slido) y del tipo de analito que deseamos medir (inorgnico u
orgnico).
En el anlisis qumico de contaminantes ambientales en el laboratorio, las muestras pueden proceder
de muestreos de atmsfera, de agua, de suelo, y de residuos. Las muestras de atmsfera suelen recogerse sobre sustratos captadores (por filtracin y por adsorcin), y sobre soluciones absorbentes, siendo menos frecuente el muestreo y transporte del gas tal cual hasta el laboratorio (caso de las bolsas
tedlar, y recipientes similares). Por ello usualmente nos encontraremos que la matriz de una muestra
de atmsfera ser lquida o slida.
Los principales tratamientos a los que se someten las muestras en funcin de su naturaleza y del tipo
de especie qumica que se quiere analizar se resumen en el cuadro siguiente:
TIPO DE ESPECIE QUMICA
INORGNICA
ORGNICA
TIPO DE MUESTRAS
Lquidas y gaseosas
Slidas
Filtracin
Centrifugacin
Extraccin lquido-lquido
Extraccin en fase slida
Lixiviacin
Solubilizacin
Extraccin slido-slido
Extraccin slido-lquido
La filtracin permite la separacin de las partculas slidas presentes en una muestra lquida o gaseosa. Los sistemas de filtracin son dispositivos ms o menos complejos que constan de un portafiltro en
el que se coloca el filtro sobre el que van a quedar retenidas las partculas. Los filtros pueden ser de
muy diferentes formas y materiales, y dimetros de poro muy variables. Los ms frecuentes en anlisis de contaminantes son los de esteres de celulosa y los de fibra de vidrio, con tamaos de 47 mm de
dimetro y porosidad de 0,45 micrmetros.
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La centrifugacin permite separar las partculas en muestras lquidas. La velocidad y el tiempo de

centrifugacin dependern del tamao de partcula que deseamos separar.
La lixiviacin consiste en separar selectivamente algn componente de una muestra slida mediante
una reaccin qumica. Terminada la reaccin, los productos resultantes se separan mediante filtracin.
En qumica ambiental, el agente lixiviante suele ser poco agresivo: agua destilada (caso del mtodo
DIN S4) o una disolucin de cido actico diluido (caso del mtodo USEPA), que estn en contacto
con la muestra durante 24 horas.
La solubilizacin de una muestra slida, o de los slidos presentes en una muestra lquida, puede
realizarse de diferentes maneras. Aqu sealaremos cuatro:
-
Agitacin
Disolucin asistida por ultrasonidos
Digestin en vaso abierto
Digestin asistida por microondas
La solubilizacin mediante agitacin trata de lograr la separacin del analito de la muestra slida
mediante medios mecnicos. Su variante ms sencilla es el empleo de barras agitadoras magnticas, o
de agitadores tipo orbital o de vaivn, en los que se introduce la muestra junto con el disolvente adecuado en un recipiente sometindolo a agitacin. La solubilizacin puede acelerarse calentando la
mezcla.
La disolucin asistida por ultrasonidos, se basa en el empleo de vibraciones sonoras superiores al
nivel auditivo humano. Los ultrasonidos agitan la disolucin mediante la formacin de burbujas microscpicas que se dilatan y contraen. Existe un punto en el que la burbuja se dilata tanto que explota,
momento en el que, por un brevsimo instante, se generan, puntualmente, elevadas presiones y temperaturas. Como consecuencia de la agitacin de la disolucin, y de las pequeas explosiones, los slidos de la mezcla se agrietan y fragmenta, facilitndose el paso de los analitos a la disolucin. La apliPgina 10 de 40
cacin de ultrasonidos suele hacerse mediante sondas, que se introducen en la disolucin, o ms

usualmente mediante baos relleno con agua en los que se sumerge el recipiente conteniendo la mezcla a tratar.
La digestin en vaso abierto consiste en disolver la muestra slida con ayuda de soluciones cidas. El
tipo de solucin, y su concentracin depender del analito que deseemos desprender del slido. El
proceso est acompaado de agitacin y calefaccin.
La digestin asistida por microondas aprovecha el efecto que produce este tipo de radiacin sobre las
disoluciones. Las microondas son ondas electromagnticas cuya frecuencia esta entre 3.108 y 3.1011
Hz. Esta radiacin provoca la rotacin de las molculas de agua, la migracin de los iones, y el movimiento de los electrones de los metales. Las molculas de agua ven frenada su rotacin al chocar con
molculas circundantes lo que provoca la transformacin de esa energa cintica en trmica, calentndose la disolucin. Los electrones de los metales ven tambin frenado su movimiento lo que provoca
un rpido calentamiento de los componentes metlicos. La aplicacin de esta modalidad de digestin
se realiza mediante hornos de microondas dotados de vasos de tefln PFA (perfluoroalkoexitileno), un
tipo de tefln con elevado punto de ebullicin (306C). La muestra se introduce en los vasos de tefln,
generalmente junto con una mezcla de cidos adecuada a cada caso. Los vasos van provistos de sensores de temperatura y de presin que detienen la digestin si se superan los valores de seguridad establecidos.
Extracciones. A diferencia de la solubilizacin, en la que se pasa un analito de un slido a una disolucin circundante; en la extraccin lo que se persigue es pasar el analito de una matriz a otra de diferente naturaleza. La extraccin suele estar referida a compuestos orgnicos de diferente polaridad a los
que se les trata de extraer aprovechando su mayor solubilidad en determinados disolventes.
La extraccin lquido-lquido consiste en poner en contacto un determinado volumen de muestra
lquida con otro de disolvente poco o nada miscible con la muestra pero s con el analito. La mezcla se
agita y posteriormente se deja en reposo hasta que ntidamente aparezcan dos fases fcilmente separables: una polar, correspondiente a la muestra, y otra apolar, que contendr la especie qumica que
queremos determinar. El dispositivo ms empleado para llevarla a cabo es el embudo de decantacin.
La extraccin en fase slida (solid phase extraction, o SPE) es un procedimiento que consiste en
hacer pasar una porcin de muestra lquida, que contiene el analito, a travs de un material sorbente
(extractante slido) por el que el analito posee mayor afinidad que por el disolvente en que se encuentra, y sobre el que queda adsorbido. Tras la adsorcin, los analitos se eluyen con una pequea cantidad
de otro disolvente extractor con el que interacciona con mayor fuerza que con el sorbente. La SPE no
slo consigue un cambio de matriz, sino que reduce el volumen de la muestra. Se realiza mediante
pequeas columnas abiertas de plstico (entre 3 y 20 ml de capacidad), con una abertura de entrada de
mayor dimetro, y otra de salida ms pequea. El sorbente se coloca en el fondo de la columna y suele
consistir en slice modificada con diferentes grupos qumicos.
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La extraccin slido-slido consiste en mezclar una pequea cantidad de muestra slida con una
cantidad similar de extractante, tambin slido, y homogeneizar. El homogeneizado se introduce en un
cartucho especial por el que se hace pasar un disolvente adecuado a la especie qumica que queremos
determinar, con lo que sta quedar en disolucin.
La extraccin slido-lquido consiste en poner en contacto la muestra slida con un lquido extractante y someter a la mezcla a una serie de operaciones que permitan que la mayor parte posible del
analito a determinar pase de la muestra al disolvente. Entre estas operaciones las ms usuales son la
agitacin mecnica (manual o mediante ultrasonidos) y la extraccin con calentamiento mediante
dispositivos tipos Soxhlet.
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4.2. Tipos de tcnicas de anlisis qumico.

Pueden clasificarse en dos grandes grupos: tcnicas clsicas, y tcnicas instrumentales.
Las tcnicas clsicas estn basadas en reacciones cuantitativas en las que se alcanza el equilibrio qumico con la intervencin del analito. La propiedad analtica que se mide es la masa
o el volumen de analito, de reactivo o del producto de reaccin que se consume o genera tras
alcanzar el equilibrio qumico. La concentracin de analito se determina a partir de clculos
estequiomtricos. Entre sus principales ventajas est el que pueden aplicarse sin necesidad de
un equipamiento ni una cualificacin tcnica sofisticada. Entre sus desventajas, el que no
suelen suministrar lmites de cuantificacin bajos, y que las incertidumbres asociadas a los
mtodos de aplicacin acostumbran a ser elevadas.
Las tcnicas instrumentales estn basadas en la medida de una propiedad fsica de la muestra cuyo valor est relacionado con la concentracin de analito, y en la mayora de los casos
con factores ajenos a dicha concentracin. Los mtodos basados en tcnicas instrumentales
tienen como principales ventajas, la rapidez de respuesta, la mayor sensibilidad y selectividad, y la posibilidad de automatizacin. Entres sus desventajas ms notables sealar: la influencia del diseo del instrumento, la mayor complejidad, y su mayor coste econmico.
4.2.1. Tcnicas analticas clsicas.

En este grupo se encuentran las gravimetras y las volumetras.
4.2.1.1. Gravimetras. Consisten en separar la especie qumica que se quiere determinar del resto de
los componentes de la muestra y proceder a su pesada. A partir de este valor se obtiene la concentracin del analito en la muestra inicial.
La instrumentacin bsica necesaria para el anlisis gravimtrico consiste en balanzas analticas,
estufas de secado regulables a las temperaturas que indiquen los mtodos de aplicacin, y hornos
mufla igualmente regulables.
Entre las aplicaciones de estas tcnicas en el anlisis medioambiental, tenemos:
La determinacin de partculas, procedentes de muestreos atmosfricos.

La determinacin de materia en suspensin, materia disuelta, y materia voltil, presentes en
las aguas.
El anlisis de aceites y grasas, en aguas residuales.
La determinacin de sulfatos, en aguas residuales.
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4.2.1.2. Volumetras. En ellas la seal analtica es el volumen de reactivo, de concentracin conocida,

que se necesita para que reaccione exactamente, de forma directa o indirecta, con la cantidad de analito que queremos determinar. Por ello, tanto el reactivo como la muestra debern estar en estado lquido. El momento en que se produce el equilibrio de la reaccin se conoce gracias a un indicador. El
indicador puede ser de muy diferente naturaleza (desprendimiento de calor, cambios en alguna propiedad elctrica en la disolucin, cromognicos, etc).
La instrumentacin bsica suele consistir en material de vidrio de uso corriente, buretas (manuales o
automticas), y en ocasiones, segn el mtodo de aplicacin, algn dispositivo indicador del final de
la reaccin (electrodos, termmetros,etc).
Las volumetras, dentro del campo del medio ambiente, se emplean para determinar bastantes parmetros. Algunos de ellos son:
xidos de azufre, en soluciones captadoras procedentes de muestreos atmosfricos.

Sulfuros, en soluciones captadoras procedentes de muestreos atmosfricos.
Amonaco, en soluciones captadoras procedentes de muestreos atmosfricos
Alcalinidad en matrices lquidas (de atmsfera o de aguas).
Materia orgnica (tanto en suelos como en residuos y en aguas).
4.2.2. Tcnicas analticas instrumentales.

Dentro del campo de la analtica ambiental, hay tres tipos de tcnicas instrumentales muy utilizadas:
- Las tcnicas ESPECTROSCPICAS.
- Las tcnicas SEPARATIVAS O CROMATOGRFICAS.
- Las tcnicas ELECTROQUMICAS.
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4.2.2.1. Tcnicas ESPECTROSCPICAS

Estn basadas en las interacciones que se producen entre la materia y la radiacin electromagntica.
Tales interacciones pueden implicar intercambios de energa, como la absorcin o la emisin de radiacin. A partir del estudio de esa absorcin o de esa emisin se puede determinar la presencia y la
cantidad de un analito en la muestra. Las radiaciones electromagnticas ms utilizadas con fines analticos son la radiacin visible (intervalo de longitudes de onda entre los 400 y los 750 nm), la radicacin ultravioleta (UV) (intervalo de longitudes de onda entre los 400 y los 200 nm), y la radiacin
infrarroja (IR) (intervalo de longitudes de onda entre los 750 y los 50 m).
Todos los tomos o molculas poseen un nmero discreto de niveles de energa. En general, a temperatura ambiente, la mayora de las especies qumicas se encuentran en un nivel energtico basal o
fundamental. Cuando una onda electromagntica alcanza a un tomo o a una molcula, si su energa
coincide exactamente con la necesaria para pasar a un nivel energtico superior, la radiacin es absorbida y la especie qumica pasa a un estado excitado. La excitacin apenas dura unos nanosegundos, al
cabo de los cuales la molcula se relaja devolviendo la energa absorbida. Estas transiciones a estados
excitados pueden ser de dos clases:
-
Electrnicas, cuando se promueve el paso de electrones a orbitales de mayor energa. Se

producen como consecuencia de la absorcin de radiacin visible y UV.
Vibracionales, asociadas a los modos vibracionales de los enlaces moleculares. Se producen como consecuencia de la absorcin de la radiacin IR.
Los mtodos analticos basados en la absorcin de radiacin electromagntica permiten determinar la

concentracin del analito gracias a la ley de Lambert-Beer, que relaciona abosrbancia con concentracin a travs de la siguiente ecuacin:
A = .b.C
Donde:
A es la absorbancia de la muestra
es la absortividad especfica de la especie que estamos estudiando. Depende tanto de la naturaleza qumica de la especie qumica como de las condiciones de medida.
b es el espesor de muestra que es atravesado por la radiacin
C es la concentracin del analito en la muestra
La absorbancia se define como log Io/I, siendo Io la intensidad de la luz incidente e I la intensidad de
la luz emergente. Al cociente I/Io tambin se le conoce como TRASMITANCIA (T), por lo que la
absorbancia tambin puede definirse como:
A= -logT
Las tcnicas espectroscpicas pueden clasificarse en funcin de su aplicacin a tomos o a molculas,
y en funcin de que lo medido sea la energa absorbida o emitida. De este modo tendremos:
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Molculas
Espectroscopia de absorcin molecular en el visible o Colorimetra.
Absorcin
tomos
Espectroscopia de absorcin atmica (EAA)
Espectroscopia de absorcin molecular en el UV.

Espectroscopia IR
Emisin
Espectroscopia de fluorescencia
Espectroscopia de emisin atmica (EEA)
A continuacin revisaremos sucintamente cada una de ellas.

Espectroscopia de absorcin MOLECULAR.
El instrumento empleado en las tcnicas de espectroscopia de absorcin molecular recibe el nombre
genrico de espectrofotmetro. Los elementos bsicos de un espectrofotmetro son:
La fuente de radiacin
El monocromador
Las celdas o cubetas
Sistema de medida
Estos elementos sufren variaciones segn el tipo de espectrosocopa de que se trate, si bien la forma
en que se ordenan viene a ser siempre la misma.
La fuente de radiacin es el elemento de la radiacin que interaccionar con la muestra. Las principales fuentes, segn el tipo de espectroscopia, se muestran en el siguiente cuadro:
Radiacin
Fuente
Infrarroja
Emisor de incandescencia de Nernst
Visible
Lmparas de incandescencia
Ultravioleta
Lmparas de arco
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El EMISOR DE INCANDESCENCIA DE NERNST consiste en una varilla de unos pocos

centmetros de largo y 1 mm de dimetro, de xido de zirconio. La varilla se calienta con una
resistencia elctrica adyacente hasta alcanzar lo 1800 K, temperatura a la que emite radiacin
infrarroja. Como a esa temperatura el material de la varilla se hace conductor, se puede mantener la temperatura haciendo pasar una corriente elctrica. Debido a que el vidrio y el slice
son materiales opacos al IR, no se pueden emplear en la fabricacin de fuentes para este tipo
de espectroscopia.
Las LMPARAS DE INCADESCENCIA son lmparas dotadas de un filamento de tungsteno capaz de calentarse hasta 3000 C emitiendo entonces un espectro continuo entre 320 y
750 nm.
Las LMPARAS DE ARCO estn formadas por una ampolla hermtica rellena de un gas,
generalmente Deuterio, y dotadas de dos electrodos conectados a una fuente de energa. Cunado se produce una descarga elctrica, se excitan las molculas del gas, y cuando vuelven a
su estado fundamental emiten luz ultravioleta en un espectro continuo de 190 a 320 nm.
El monocromador es elemento que selecciona una longitud de onda determinada de entre las muchas
que parten de la fuente. Para ello est dotado de una serie de lentes, prismas, espejos, y rendijas.
Las celdas o cubetas son los dispositivos en los que se coloca la muestra a analizar, y que sern atravesados por la radiacin, por lo que deben disponerse perpendicularmente al paso de sta. Segn la
clase de radiacin se deben usar cubetas de distinta naturaleza:
Radiacin
Cubeta
Infrarroja
Cloruro sdico pulimentado
Visible
Plstico, vidrio o cuarzo
Ultravioleta
Cuarzo
El sistema de medida es el encargado de detectar la radiacin que atraviesa la muestra y transformarla en una corriente elctrica que se mide una vez amplificada en el circuito electrnico de lectura. Para
tal fin suelen emplearse fototubos, y fotodiodos.
Existen dos grandes categoras de espectrofotmetros:
Espectrofotmetros de haz sencillo

Espectrofotmetros de doble haz.
En los de haz sencillo el haz de luz sigue una nica trayectoria desde la fuente hasta el detector. Estso
equipos pueden disponer de una o de dos celdas portamuestras. Cuando tienen una sola celda, hay que
realizar primero la medicin con la celda con el blanco, y despus con la muestra. Cuando existen dos
celdas, un sistema mecnico mueve la celda con el blanco despus de la medida.
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Los espectrofotmetros de doble haz disponen de un sistema ptico, emplazado tras el monocromador, que divide en dos el haz de luz. Ambos haces siguen caminos paralelos y van hasta fotodetectores
independientes cuyas seales son integradas y amplificadas, lo que permite medir simultneamente el
blanco y la muestra. Este sistema resulta mucho ms estable que el de haz sencillo.
Con frecuencia los equipos de espectrofotometra visible estn provistos de fuentes de radiacin que
les permiten trabajar en el espectro UV.
Las tcnicas espectrofotomtricas no pueden emplearse en la determinacin de cualquier analito, pues

la capacidad de absorcin de las especies qumicas a esas longitudes de onda va a depender de la estructura de la molcula, del tipo de enlaces, y de su absortividad. Con todo su empleo en qumica
ambiental est muy extendido. Algunas aplicaciones son:
Determinacin de aniones, y de indicadores de contaminacin orgnica (DQO, ndice de fenoles, detergentes), por espectrofotometra UV-visible. En todos los casos es necesario tratar
las muestras con reactivos que permitan un desarrollo del color y una eliminacin de las interferencias.
Determinacin de aceites y grasas e hidrocarburos por espectrofotometra de IR.
Espectroscopia de emisin MOLECULAR.

Determinadas molculas pueden absorber radiacin electromagntica excitndose, para luego relajarse
emitiendo esa energa en forma de fotones. Este fenmeno tambin se conoce como
FLUORESCENCIA, y la tcnica que permite determinar la presencia de un analito fluorescente,
ESPECTROSOCOPA DE FLUORESCENCIA. Las principales caractersticas de la espectroscopia
de fluorescencia son:
-
Una sensibilidad superior a los mtodos de absorcin.

Un mayor intervalo de respuesta lineal que el de los mtodos de absorcin.
Una aplicacin restringida a un menor nmero de especies moleculares.
Un equipamiento ms costoso que el de la espectroscopia de absorcin.
No todas las molculas fluorescen, porque pueden presentar otras vas de relajacin alternativas, por
ejemplo las vibracionales. El que una molcula sea o no capaz de fluorescer depender en gran medida de su estructura. As, la mayora de los compuestos con anillos aromticos fluorescen, y dentro de
stos lo hacen en mayor cuanta los que presentan estructuras rgidas.
El equipo de medida de fluorescencia, o fluormetro consta de los siguientes componentes:
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Una fuente de luz,

Un selector de longitud de onda de entrada
Una celda, en la que se coloca la muestra
Un selector de longitud de onda de salida
Un detector
Un registrador
Dentro del campo de la qumica ambiental, la principal aplicacin de las tcnicas de fluorescencia la
encontramos en los detectores de equipos de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) empleados en la determinacin de Hidrocarburos Policclicos Aromticos.
Espectroscopia de absorcin ATMICA.
Sus principales caractersticas son:

-
Se aplica a tomos aislados.

Slo se puede llevar a cabo dentro de un medio gaseoso.
Permite la determinacin cuantitativa y cualitativa de 70 elementos qumicos.
Es un mtodo de determinacin unielemental.
En general son rpidos, selectivos y sensibles.
Los componentes de un equipo de absorcin atmica son:
El nebulizador.
El atomizador.
La fuente de radiacin.
El monocromador.
El detector.
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El nebulizador es un dispositivo que convierte la muestra lquida en un aerosol que pasa luego al
atomizador. Los dos principales tipos de nebulizadores son los nebulizadores neumticos y los nebulizadores ultrasnicos.
El nebulizador neumtico funciona de modo similar a un pulverizador de perfume: una corriente de
gas a alta presin choca contra el lquido en la punta de un capilar descomponindolo en finas gotas.
El nebulizador ultrasnico es un nebulizador neumtico en el que las gotas de lquido nebulizado se
hacen impactar contra una placa que vibra por efecto de un sistema de ultrasonidos, rompindolas en
gotas an ms diminutas.
El atomizador es el componente encargado de vaporizar la muestra nebulizada. Bsicamente se emplean dos tipos: los atomizadores de llama, y los atomizadores electrotrmicos.
El atomizador de llama consiste en un quemador alimentado por una mezcla de combustible y oxidante, capaz de alcanzar temperaturas de entre 1700 y 3100 C.
El rango de temperatura a aplicar depender de los elementos que se quieran analizar: as los metales
pesados necesitan temperaturas de excitacin ms elevadas que los dems. La temperatura depender
de la composicin de la mezcla de gases que se quemen: la mezcla gas natural/aire suministra temperaturas ms bajas, y la de acetileno/xido nitroso las ms elevadas.
La muestra nebulizada es inyectada por la base de la llama, en cuyo seno se produce la evaporacin de
la matriz y la separacin y excitacin de los tomos de analito.
Puesto que la espectroscopia de absorcin sigue la ley de Lambert-Beer, la mayor longitud del paso
ptico aumenta la sensibilidad, motivo por el cual se suelen emplear quemadores denominados de
ranura o de flujo laminar, que suministran llamas de una gran longitud.
Los atomizadores electrotrmicos, tambin llamados cmaras u hornos de grafito, consisten en pequeos cilindros de grafito (de 1 cm de dimetro), abiertos por los extremos, y con un orificio para la
introduccin de la muestra. En los extremos del tubo existen unos contactos elctricos por lo que se
suministra durante un corto espacio de tiempo una corriente de alta intensidad. Como consecuencia
del calentamiento as inducido, la muestra se atomiza.
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La fuente de radiacin proporciona la radiacin que atraviesa la muestra atomizada. Se suelen empelar dos tipos de fuentes: las lmparas de ctodo hueco, y las lmparas de descarga sin electrodo.
Una lmpara de ctodo hueco consiste en un cilindro de vidrio, en uno de cuyos extremos se disponen
dos alambres de volframio. Uno de ello acta como ando, y el otro como ctodo. Este ltimo se une
por su extremo a un cilindro hueco de metal, recubierto por el metal que se desea determinar. La lmpara esta llena de helio o de argn. Cuando se hace pasar corriente el gas se ioniza, y sus partculas
bombardean el ctodo, excitando a los tomos metlicos. Cuando stos se relajan lo hacen emitiendo
radiacin en una longitud de onda caracterstica.
Las lmparas de descarga sin electrodo, son lmparas de cuarzo llenas de argn y de una sal del elemento que se quiere analizar. La fuente de energa para ionizar el gas no proviene de electrodo alguno,
sino de un intenso campo electromagntico de radiofrecuencias o de microondas.
El monocromador consiste en un dispositivo que selecciona la longitud de onda del elemento que
queremos determinar.
El detector es el dispositivo que recoge la radiacin seleccionada por el monocromador y la compara
con la enviada por la fuente, permitiendo la deteccin y cuantificacin del elemento analizado.
Existen dos variantes de la absorcin atmica de inters en qumica ambiental. Se trata de la absorcin
atmica de vapor fro y de la absorcin atmica con generador de hidruros.
La tcnica de absorcin atmica de vapor fro se aplica en la determinacin de mercurio. Aprovecha
la volatilidad que presenta este elemento. Para ello se transforma el mercurio presente en la muestra
en sales de mercurio II mediante digestin con cidos ntrico y sulfrico. A continuacin se pasa el
mercurio a estado metlico mediante reduccin con hidroxilamina o con sulfato de estao II. Una vez
que el mercurio se encuentra en estado metlico, se bombea a travs de disolucin aire que arrastra al
mercurio hacia una celda por la que pasa una radiacin de 254 nm. Para evitar la presencia de agua, la
corriente de aire que porta el mercurio se hace pasar antes por un tubo desecador.
En la generacin de hidruros se aprovecha el hecho de que los hidruros de algunos elementos (Arsnico, Bismuto, Germanio, Plomo, Antimonio, Selenio, Estao, Teluro) son ms voltiles que el elemento mismo, lo que permite una mejor atomizacin. La obtencin del hidruro correspondiente se
logra mezclando borohidruro sdico en medio bsico con una disolucin cida del metal.
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Espectroscopia de emisin ATMICA.
Las principales caractersticas de esta tcnica son:

-
Est basada en que cada elemento presente en una muestra va a emitir, una vez excitado,
radiacin a una longitud de onda especfica.
El atomizador sustituye a la fuente de radiacin.
Se trata de una tcnica multielemental, es decir, puede analizar simultneamente muchos
elementos.
Puede presentar problemas de interferencia espectral: existen elementos que emiten a
longitudes de onda muy prximas (por ejemplo, el Calcio a 423 nm y el Cromo a 425
nm).
Resulta ms rpida y menos costosa que la espectroscopia de absorcin atmica.
Su sensibilidad y selectividad se pueden ver enormemente mejoradas si se acopla a un
espectrmetro de masas.
El componente ms relevante de un equipo de emisin atmica es el atomizador. Como dispositivos

de atomizacin pueden utilizarse una llama, un arco elctrico, o ms habitualmente, un plasma de
induccin.
Un plasma es un gas ionizado. Cuando se induce en un flujo de un gas, generalmente argn, recibe el
nombre de induced coupled plasma o ICP. Las antorchas de ICP consisten en tubos de cuarzo por
los que circula una corriente de argn. El gas se ioniza por efecto de una corriente elctrica, y los
iones generados son obligados a circular por un espacio anular cerrado dentro de un campo magntico
de radiofrecuencia. La resistencia a su circulacin provoca un calentamiento del gas que da lugar a
una nueva ionizacin, pasando as a estado de plasma, alcanzndose temperaturas de hasta 10000 K.
La muestra es introducida dentro del plasma por una corriente de argn, producindose en su seno la
atomizacin y consecuente excitacin.
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4.2.2.2. Tcnicas CROMATOGRFICAS

Se trata de un conjunto de tcnicas que permiten la separacin de los componentes presentes en una
mezcla en base a su diferente movilidad en un medio poroso cuando son arrastrados por un fluido. El
medio poroso recibe el nombre de fase estacionara, y el fluido (gas o lquido) el de fase mvil. En
lneas generales, en todo sistema cromatogrfico se distinguen los siguientes componentes:
-
La fase estacionaria; se trata del material inmvil sobre el que se produce la separacin
de los analitos.
El soporte, que es el material sobre el que descansa la fase estacionaria.
La fase mvil, que es el fluido que arrastra a la muestra a travs de la fase estacionaria.
Detector, aparato que registra una propiedad fsico-qumica del analito que va saliendo
(eluyendo) de la fase estacionaria.
Cromatograma, representacin de una propiedad fsico-qumica del eluido en funcin
del tiempo o del volumen de elusin.
Las caractersticas de cada uno de estos componentes varan segn el tipo de tcnica. Existe un gran
nmero de tcnicas cromatogrficas, de entre ellas las ms utilizadas en qumica del medio ambiente
son:
Cromatografa inica.
Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).
Cromatografa de gases (GC).
Cromatografa INICA
Se trata de un tipo de cromatografa liquida, una modalidad de separacin en la que la fase mvil es un
lquido. Sus principales caractersticas son:
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La fase estacionaria es una resina, natural o artificial, dotada de cargas en su superficie.

Segn la carga la resina podr ser de intercambio aninico (si est cargada positivamente) o de intercambio catinico (si la carga es negativa).
El soporte es una columna en cuyas paredes interiores se encuentra la fase estacionaria.
La fase mvil es un lquido, generalmente agua destilada. Se puede variar la fuerza inica de esta fase para lograr la elucin de los analitos de la fase estacionaria.
Detector, el su aplicacin ms comn, la determinacin de iones inorgnicos, se suele
emplear un detector de conductividad; un sistema que mide la resistencia al paso de la
electricidad por una solucin acuosa. Tambin pueden emplearse equipos de absorcin
molecular.
El cromatograma podr registrar bien volmenes de elucin frente a conductividad elctrica, o bien frente a absorbancias a determinadas longitudes de onda.
Como ya se ha sealado, la principal aplicacin de esta tcnica es la determinacin de iones inorgnicos, especialmente aniones. Resulta muy verstil en el anlisis de estos componentes en muestras
lquidas (soluciones absorbentes procedentes de muestreos atmosfricos, o en muestras de agua).
Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC)
Se trata de una variante de cromatografa lquida (LC) en la que la fase mvil y la muestra se hacen
pasar a travs de la columna mediante una bomba de alta presin, y en los que la muestra se inyecta de
modo tal que el flujo no se ve interrumpido. Todo ello para lograr que los analitos de la muestra interacciones con una fase estacionaria formada por partculas alteamente empaquetadas, lo que proporciona una mayor eficiencia del proceso cromatogrfico.
Los principales componentes de un cramtgrafo HPLC son:
La bomba de impulsin.
El sistema de inyeccin.
La columna.
Detector.
La bomba de impulsin debe ser capaz de suministrar una presin de varias atmsferas. Las modalidades ms utilizadas son las bombas de desplazamiento positivo, o de jeringa; y las bombas de pistn
con movimiento de vaivn. Las primeras deben ser rellenadas cada vez que se vacan, mientras que las
segundas pueden mantener el flujo por tiempo indefinido.
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El sistema de inyeccin introduce la muestra en la corriente de fase mvil que fluye de la bomba a la
columna, sin producir una interrupcin del flujo ni alterar la presin. Puede ser manual o automtico.
La columna en HPLC consiste en un cilindro de acero de 10 a 25 cm de largo y 4 a 5 mm de dimetro
interno, y contienen la fase estacionaria dividida en partculas de 2 a 10 micras. Suelen tener filtros a
la entrada para evitar la entrada de partculas que pudiesen existir en la muestra.
Los detectores ms usuales en HPLC son el de absorcin UV-VIS, y el de fluorescencia. Entre los
detectores de UV-VIS los ms frecuentes son los de longitud de onda variable, y los de diodo array.
En los primeros se selecciona la longitud de onda a la que se desea medir mediante una red de difraccin. En los segundos, el detector suministra el espectro de absorcin de UV-VIS del material eluido.
Entre las aplicaciones de la HPLC en el campo de la determinacin de contaminantes ambientales
destacan el anlisis de los Hidrocarburos Policclicos Aromticos (PAHs), Trazianas, y cianotoxinas
como las microcistinas.
Cromatografa de GASES (GC)
En la GC los analitos, en estado gaseoso, se reparten entre una fase mvil gaseosa, y una fase estacionaria slida o lquida.
Los componentes bsicos de un cromatgrafo de gases son:
Depsito de gas portador.

Regulador de flujo.
Inyectores.
Columnas.
Detectores.
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El depsito de gas portador suele consistir en una bala de gas comprimido. Su misin es doble, por
un lado desplazar a los analitos por el interior de la columna, y por otro suministrar una matriz adecuada al detector. Para ello debe cumplir tres requisitos: ser inerte, poder obtenerse con una elevada
pureza, y no representar un gasto econmico importante. Como gases portadores suelen utilizarse el
nitrgeno, el helio, el hidrgeno, y el argon.
El regulador del flujo del gas, consiste en un dispositivo electrnico que permite controlar la velocidad de la fase mvil.
Los inyectores, son las partes del sistema por donde se introduce la muestra, mediante microjeringas;
bien manualmente, o preferiblemente, por medio de un inyector automtico. Adems de ser el punto
de entrada en la columna cromatogrfica, es el sitio donde se produce la volatizacin y mezcla de las
sustancias a determinar, por lo que la temperatura de esta parte del equipo tiene que estar muy bien
controlada.
Las columnas, que contienen la fase estacionaria, pueden ser de dos clases: empaquetadas y capilares.
Ambas se diferencian en su longitud, dimetro interior, y naturaleza. Las empaquetadas tienen entre 1
y 2 m de largo, su dimetro interior es de 1 a 2 mm, y estn fabricadas en acero inoxidable. Las capilares alcanzan los 10 m de longitud, y estn hechas de slice fundida. Las columnas se alojan en el interior de un horno dotado de un sistema de calefaccin elctrico, un ventilador y un dispositivo de apertura, todos ellos controlados por un microprocesador. El control de la temperatura en la columna es
crucial para una buena separacin cromatogrfica: debe ser lo suficientemente alta como para permitir
la volatilizacin de los componentes de la muestra pero no tan elevada como para descomponerlos.
Los detectores ms empleados en GC son: de conductividad trmica (TCD), de ionizacin a la llama
(FID), de captura electrnica (ECD), de fsforo-nitrgeno (NPD), fotomtrico de llama (FPD), y el
espectrmetro de masas (MS). De entre todos ellos, los ms habituales en qumica de contaminantes
ambientales son el FID, el ECD, y el MS. En el cuadro adjunto se muestran las aplicaciones ms corrientes para cada tipo de detector:
ANALITOS
Compuestos Orgnicos Voltiles no halogenados
Compuestos Orgnico Voltiles halogenados
Bifenil policlorados/Plaguicidas organoclorados
TCNICA CG
Deteccin mediante FID
Deteccin mediante espectroscopia de masas
Deteccin mediante ECD
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4.2.2.3. Tcnicas ELECTROANALTICAS

Estn basadas en la interaccin entre un campo electromagntico y la disolucin del analto que se
quiere determinar. Como seal analtica pueden utilizar la conductividad de la disolucin, la diferencia de potencial entre dos puntos de la misma y la corriente o carga que circula en ella.
Los procesos electroqumicos en que se basna tienen lugar en las llamadas celdas electroqumicos.
Estos dispositivos estn formados por:
Una cuba electroltica, formada de material inerte y que va a contener la disolucin objeto de
anlisis.
Dos o tres conductores elctricos, los electrodos.
Un circuito externo responsable de generar el campo elctrico entre los electrodos
Las tcnicas electroanalticas pueden clasificarse en dos grupos:

* Tcnicas interfaciales, basadas en los fenmenos que ocurren en las interfases electrodo disolucin.
Las ms habituales en el campo medioambiental son las potenciometras.
* Tcnicas no interfaciales, basadas en fenmenos que ocurren en el seno de la disolucin. La ms
habitual en el estudio de muestras ambientales es la conductimetra.
Potenciometras.
Cuando en la disolucin no hay paso de corriente, o ste es despreciable, su composicin permanece

inalterada. En estas circunstancias, el potencial del electrodo se puede relacionar con la actividad de la
especie qumica objeto de estudio a travs de la ecuacin de Nerst:
E = EO (0,05916/n)logQ
Donde:
E es el potencial del electrodo.
Eo es el potencial en condiciones estandar.
n es el nmero de electrones transferidos en la reaccin de reduccin de la especie inica.
Q es el cociente entre las concentraciones de las formas reducida y oxidada de la especie.
La instrumentacin bsica para el anlisis potenciomtrico consiste en la celda electroltica, dos electrodos, y un sistema de medida. Uno de los electrodos el indicador, y el otro es el de referencia. El
primero es el que tiene un potencial sensible a la concentracin del in que queremos analizar, y el
segundo dispone de un potencial constante.
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Los electrodos indicadores ms ampliamente utilizados son los de membrana. Estn dotados de una
membrana permeable a un solo tipo de in, por lo que tambin se les llama selectivos. El interior del
electrodo suele estar relleno de una solucin interna de referencia atravesada por un hilo conductor.
Como electrodo de referencia, el ms ampliamente utilizado es el de plata/cloruro de plata: esta formado por un hilo de plata en contacto con una disolucin de cloruro potsico a travs de un depsito
de cloruro de plata.
Las principales aplicaciones medioambientales de la tcnicas potenciomtricas las encontramos en la
medicin del pH, la determinacin de amonio, y el anlsis de una amplia gama de aniones, especialmente fluoruros, cloruros, sulfuros, y cianuros.
Conductimetra.
Tiene como fundamento la medida de la resistencia de una disolucin al paso de la corriente elctrica.
De acuerdo con la ley de Ohm:
I = E/R
Dnde I es la intensidad de corriente que atraviesa, E es la diferencia de potencial, y R es la resistencia al paso de la corriente. Se define la CONDUCTANCIA como la inversa de R, y se mide en ohms-1
o tambin mhos o siemenes. Cuanto mayor sea el paso de corriente, menor ser el valor de R y por
tanto mayor ser la conductancia de la disolucin. Ello se cumple en disoluciones con un elevado
contenido en sales disueltas. Este hecho convierte a la medida de la conductividad en un parmetro de
gran inters a la hora de evaluar rpidamente el contenido en sales de una masa de agua, por lo que se
le incluyen en numerosas normativas relacionadas con el control de este medio.
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5. TCNICAS DE ANLISIS MICROBIOLOGICO.

De una manera un tanto arcaica, se entienden por microorganismos o microbios todos aquellos seres
vivos que no pueden observarse a simple vista: virus, bacterias, protozoos, y un gran nmero de taxones de hongos y de algas. El objeto de estas tcnicas es el aislamiento, la identificacin y la cuantificacin de microorganismos. Para lograrlo existen dos vas principales:
-Aislando el grupo que queremos investigar a travs de promocionar su crecimiento selectivo bajo
condiciones de laboratorio, y luego identificarlo en funcin de sus caractersticas fenotpicas. Esta es
la modalidad clsica, basada en el uso de medios de cultivo e identificaciones por pruebas bioqumicas
y/o serolgicas.
-Aislando y amplificando selectivamente su material gentico; modalidad ms moderna basada en el
empleo de las tcnicas de biologa molecular.
En la actualidad, y cindonos a lo que la normativa medioambiental establece para el control de
parmetros microbiolgicos, la modalidad ms extendida en los laboratorios de medio ambiente es la
clsica. La nica matriz ambiental en la que se encuentra legislada la determinacin de microorganismos es el agua, y los principales microorganismos sujetos a norma son bacterias. Dentro de estas
normas se encuentran las de caracterizacin de aguas continentales superficiales destinadas a la produccin de agua potable, y la de bao en aguas no tratadas. Adems, existen dos normativas que,
aunque sanitarias, estn en realidad a caballo entre la sanidad y el medio ambiente: la legislacin sobre aguas de consumo, y la de control de la legionelosis. En cuanto a las bacterias a investigar, su
tipologa es bastante limitada, pudiendo distinguirse entre dos categoras:
-
Grupos de bacterias con caractersticas comunes pero sin categora taxonmica alguna: por
ejemplo, los grmenes aerobios a 22C, o los coliformes totales.
Taxones especficos: caso de Escherichia coli, Salmonella, o Legionella pneumophilla
En lneas generales, los mtodos clsicos de anlisis microbiolgico de aguas, constan de tres partes:
Concentracin de la muestra.
Siembra.
Incubacin.
Identificacin
Concentracin de la muestra. Este paso depende del tipo de agua que se desea estudiar y del tipo de
microorganismo que se pretende aislar. Cuando se sospecha que la presencia de las bacterias objeto de
estudio es muy elevada se obvia o incluso se reemplaza por la dilucin de la muestra. Sera el caso de
la investigacin de E.coli en aguas residuales domsticas. El mtodo ms habitual de concentracin es
la filtracin de un volumen importante de muestra (de 1 a 5 litros) a travs de filtros de membrana
estriles de no ms de 0,45 micrmetros de poro. Para la filtracin se emplean dispositivos esterilizables dotados de una bomba de vaco o peristltica.
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Siembra. Se realiza en medios de cultivo, esto es, sustratos que contienen una serie de nutrientes que
permiten el crecimiento de las bacterias. Estos medios pueden ser lquidos (caldos de cultivo) o slidos (agares). En el caso de los primeros, la siembra se realiza por incorporacin de determinados
volmenes de muestra al caldo; en el caso de los segundos la siembra puede efectuarse, bsicamente,
mediante tres formas:
- Filtracin. En cuyo caso la concentracin ya servira como procedimiento de siembra. En
ocasiones lo que se filtra va a ser un volumen conocido de la muestra diluida con solucin salina estril o con un medio de cultivo lquido estril. La dilucin de la muestra con agua destilada puede daar las clulas debido a fenmenos de choque osmtico. Una vez filtrada la
muestra, el filtro de deposita, con ayuda de unas pinzas estriles, sobre un medio slido de
cultivo adecuado.
- Inoculacin en superficie. A partir de la muestra bruta, de una dilucin de la misma, o de la

suspensin del filtro de concentracin, se siembra en un medio slido apropiado depositando
en superficie un pequeo volumen (generalmente entre 100 y 500 microlitros), y extendindolo uniformemente con la ayuda de un asa de siembra.
- Inoculacin en profundidad. En el interior de una placa de Petri vaca se coloca un determinado volumen de la muestra y a continuacin se vierte sobre l medio de cultivo licuado, se
homogeiniza, y se espera a que el conjunto solidifique. La temperatura del medio licuado debe ser tal que le permita estar fundido pero que no sea tan elevada como para destruir a las
clulas.
Incubacin. Una vez inoculados, los medios se incuban a temperaturas especficas para cada tipo de
microorganismo, en incubadores capaces de regular la temperatura en rangos bajos (el intervalo de
trabajo suele estar entre los 22C y los 44C), y durante tiempos que pueden ir de 24 horas para los
coliformes a los 15 das para Legionella. Esta incubacin puede realizarse bajo dos tipos de condiciones:
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- Aerbicas; cuando el metabolismo de la bacteria que deseemos aislar requiera la presencia

de oxgeno. En estos casos no el incubador no necesita dispositivo adicional alguno.
- Anaerbicas; si para el metabolismo del microorganismo objeto de estudio el oxgeno resulta txico (caso del Clostridum perfringens, un indicador de la calidad de agua de consumo).
En este caso las placas conteniendo el medio de cultivo inoculado se introducen en jarras de
anaerobiosis, unos dispositivos con cierre hermtico dotados de un reactivo qumico que elimina el oxgeno del interior de la jarra, y de un indicador coloreado que seala la ausencia de
oxgeno.
Identificacin. La identificacin puede realizarse directamente a partir de la siembra en medios selectivos, esto es, medios de cultivo cuya composicin inhibe el crecimiento de una posible flora acompaante. Los medios selectivos en general constan de:
-
Nutrientes especficos para el microorganismo que deseamos aislar.

Inhibidores de flora acompaante (antibiticos, sales biliares, sale minerales).
Indicadores cromognicos, sustancias qumicas que cambian de color cuando, como consecuencia del metabolismo de la bacteria objeto de estudio, se modifica el pH del medio.
Segn el microorganismo se puede utilizar un solo medio selectivo (caso de los enterococos) o varios
(como ocurre con Salmonella).
En cualquier caso, una vez aisladas las colonias suele requerirse una identificacin ms exacta, lo que
se logra mediante tests bioqumicos, pruebas serolgicas, o microscopa de epifluorescenia.
Los tests bioqumicos estn estandarizados bajo la forma de galeras de identificacin. Las galeras se
acompaan de claves numricas y programas de ordenador que permiten una rpida identificacin de
las colonias a nivel de gnero y de especie.
Entre los serolgicos los ms populares son los de aglutinacin, que se basan en reacciones antgenoanticuerpo.
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La microscopa de fluorescencia es un tipo de microscopa ptica que requiere la reaccin de las colonias con un reactivo fluorescente a travs de reacciones tipo antgeno-anticuerpo. En el campo que nos
ocupa se suele emplear slo para la identificacin de Legionella pneumophilla.
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6. TCNICAS DE ANLISIS TOXICOLOGICO.

La toxicologa tiene por objeto el estudio de los efectos de las sustancias qumicas con los seres vivos
en sus circunstancias particulares. De sus diferentes ramas, la que aqu resulta de inters es la toxicologa ambiental o ecotoxicologa cuyo mbito de aplicacin son los contaminantes ambientales y su
influencia sobre los ecosistemas. Para abordar este estudio se puede partir de dos enfoques relacionados con diferentes niveles de organizacin biolgica:
- El nivel de los organismos individuales; en cuyo caso se evalan los efectos sobre individuos aislados, extrapolndose los efectos a especies de similares caractersticas.
- El nivel de los ecosistemas; en dnde se pretende evaluar el impacto de los txicos sobre las
biocenosis a partir de los diferentes niveles trficos.
El primer enfoque se enraza con la toxicologa clsica, y el segundo se identifica con la ecotoxicologa propiamente dicha.
6.1. Tcnicas clsicas.

Dentro de este apartado debemos sealar dos grupos:
-Tcnicas in vivo.
-Tcnicas in vitro o alternativas.
Las primeras se definiran, de forma tradicional, como aquellas que emplean como animales de experimentacin, a los mamferos, debido a que los resultados se suponen extrapolables a la especie humana. Las segundas. Las tcnica in vitro emplean organismos llamados inferiores (hongos, bacterias,algas), rganos prefundidos, cultivos celulares y de tejidos, etc. Algunas pruebas pueden sustituir
a los ensayos in vivo y otras servir de cribado previo, con lo que se reduce el empleo de animales de
laboratorio.
Tanto unas como otras fundamentan el estudio de la toxicidad en observar la respuesta biolgica de un
organismo de experimentacin frente a diferentes dosis de txico, en un intervalo dado de tiempo,
suministrado a travs de una va concreta de administracin.
Diferentes individuos de una misma especie presenta distinta sensibilidad a un mismo txico. Ello se
debe, en general, a que los mecanismos de detoxificacin estn mediados por protenas especficas
(citocromo P450, alcoholdeshidrogenasas, receptores, metalotionenas) muchas de ellas sujetas a variabilidad gentica, en ocasiones ligada al sexo. Con el fin de paliar este efecto y de lograr una mayor
significacin estadstica, los ensayos no se realizan sobre un nico individuo, sino sobre un conjunto
de ellos de diferente sexo (entre 5 y 10 especmenes por gnero).
Tradicionalmente, la respuesta biolgica que se evala es la muerte del individuo. Ello da lugar al
concepto de Concentracin Letal 50 o LC50, definido como la concentracin de sustancia txica que
produce la muerte del 50% de la poblacin de estudio en unas condiciones de experimentacin dadas.
Cuando la respuesta biolgica no es la muerte, sino, por ejemplo, la aparicin de eritema, o lo cambios
en una determinada actividad enzimtica, la LC es reemplazada por la EC o concentracin efectiva.
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Generalmente se distinguen dos formas de toxicidad en funcin del tiempo de exposicin: aguda y
crnica. La primera corresponde a tiempos cortos (48 96 horas), y la segunda a tiempos ms prolongados (semanas, meses, o aos). Para un estudio completo de la posible toxicidad de un compuesto es
necesario realizar ensayos de toxicidad agudos y crnicos, puesto que ciertos efectos biolgicos, como
la aparicin de tumores, slo pueden apreciarse tras largos periodos de exposicin.
La forma en que se administra un txico es de gran importancia para evaluar la toxicidad de una sustancia. As, por ejemplo, el mercurio metlico manifiesta una toxicidad mucho ms alta por inhalacin
que por ingestin. Las principales vas de administracin en los ensayos in vivo son:
-
Inhalacin.
Ingestin (va oral).
Drmica.
Ocular.
Parenteral.
Ensayos in vivo.
A ttulo de ejemplo describiremos someramente los ensayos de toxicidad oral y de toxicidad drmica.
Toxicidad oral aguda.
Como animales de experimentacin suelen emplearse ratas o ratones de laboratorio de una determinada raza y con pedigr certificado. Deben ser animales sanos, adultos de ambos sexos y en un nmero
por lo general no inferior a 10 (5 machos y 5 hembras), con un peso conocido y similar para todos los
componentes de lote.. La sustancia problema se les suministra por va oral, con frecuencia a travs de
una sonda, en una o varias dosis segn el protocolo. A lo largo de varios das se observa el comportamiento de los animales, registrndose el nmero de muertes. Pasado el tiempo del ensayo se contabilizan los animales muertos, se realizan necropsias en busca de posibles alteraciones anatomopatolgicas, y se calcula la LC50. Los supervivientes son sacrificados.
Toxicidad drmica aguda.
Los animales de experimentacin ms utilizados suelen ser conejos de una raza concreta, con certificado de pedigr, y en perfecto estado de salud. El nmero puede ser inferior que en el caso del ensayo
de toxicidad oral, pero como en este ensayo, se deber conocer su peso que deber ser lo ms homogneo posible para todo el lote. El lomo de los animales es escrupulosamente rasurado y sobre el se
aplica, en forma de pomada y con ayuda de un apsito, la muestra a ensayar. Se observa durante el
periodo de prueba la alteracin de la piel, anotndose el nmero de animales afectados, as como las
caractersticas de la lesin. Terminado el periodo de la prueba se calcula la EC50, y se procede al
sacrificio de todos los animales del lote.
En el campo de la contaminacin ambiental, este tipo de anlisis se realiza para la caracterizacin de
residuos con el fin de poder clasificarlos como txicos, y en consecuencia asignarle una o varias caractersticas de toxicidad. La normativa a aplicar es el Real Decreto 952/1997 por el que se modifica
el reglamento para la ejecucin de la ley 20/1986 de Residuos Txicos y Peligrosos. Este R.D. no
seala explcitamente que mtodos de ensayo se deben aplicar, remitiendo para ello al Real Decreto
363/1995 sobre notificacin de sustancias nuevas y clasificacin, envasado y etiquetado de sustancias
peligrosas. El 363/1995, en su anexo V parte B contempla diversos mtodos para determinar la toxicidad, si bien no indica cuando emplear uno u otro. De estos ensayos los ms demandados suelen ser la
determinacin de la toxicidad oral aguda, y la determinacin de la toxicidad aguda va drmica.
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Ensayos in vitro.
Existe una amplia gama de este tipo de pruebas, pero desde el punto de vista prctico nos limitaremos
a describir uno de los mtodos ms aceptados para establecer la caracterstica H11 mutagenicidad
descrita por el R.D. 952/1997. Se trata del tests de Ames.
Test de Ames. La mutagenicidad es la capacidad de alterar la estructura del ADN causando una aberracin gentica o mutacin. Algunos productos qumicos, o sus derivados metablicos son sustancias
mutagnicas o mutgenos. Para evaluar este potencial, el Dr. Ames, de la Universidad de California,
ide, en los aos setenta del pasado siglo, un test que emplea a las bacterias como organismos de
experimentacin. El ensayo puede utilizar cepas de Salmonella typhimurium o de Eschercichia coli.
Se trata de cepas seleccionadas incapaces de crecer en ausencia del aminocido histidina, debido a que
su ADN est mutado para su sntesis. Si las bacterias mutantes ( His-) son expuestas a mutgenos,
stos pueden corregir la mutacin en algunas clulas (reversin), dando lugar a clulas revertientes
(His+) que si pueden crecer en agar sin histidina formando colonias visibles y cuantificables. La potencia del mutgeno ser directamente proporcional al nmero de colonias revertientes que produzca.
Con objeto de que el sistema sea ms aplicable a los mamferos puede aadirse al medio de cultivo
enzimas hepticas en forma de extracto microsomal S-9 proveniente de hgado de rata.
6.2. Tcnicas Ecotoxicolgicas.

La evaluacin del impacto de los txicos sobre los ecosistemas mediante ensayos de laboratorio se
enfrenta con la dificultad que tiene reproducir in vitro, y de manera controlada, la complejidad de un
ecosistema, y la ampla variedad de stos. Necesariamente se debe acudir a simplificaciones, mucho
ms factibles en lo que se refiere a ecosistemas dulceacucolas que a ecosistemas marinos y terrestres.
En general el inters de los investigadores se centra sobre organismos abundantes y caractersticos de
cada uno de los principales niveles trficos. Los ensayos pueden realizarse sobre microcosmos (ecosistemas simplificados y miniaturizados a escala de laboratorio) o sobre poblaciones de organismos de
niveles trficos concretos. Son estos ltimos los que mayor aplicacin prctica tienen. De ellos pasamos a describir dos, seleccionados por su presencia en las normativas y su difusin comercial. Se trata
del ensayo de bioluminiscencia con la bacteria Vibrio fischeri; y el de inhibicin con el microcrustceo Daphnia magna.:
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Bioluminiscencia con V.fischeri. El organismo que emplea el ensayo es la bacteria marina bioluminiscente V.fischeri. Este microorganismo posee en su metabolismo una cadena respiratoria dotada de un
intermediario luminiscente, de manera que, bajo condiciones normales, la bacteria emite luz de manera continua. Si el organismo entra en contacto con una sustancia potencialmente txica, su cadena
respiratoria puede verse directa o indirectamente bloqueada, disminuyendo o desapareciendo la emisin de luz sin que ello comporte necesariamente la muerte de la bacteria. En el ensayo de bioluminiscencia un pull de bacterias, suspendido en una solucin salina adecuada, se pone en contacto con
diferentes concentraciones de la sustancia de ensayo. La emisin de luz se, mide y registra con ayuda
de un fotoamplificador, a distintos intervalos de tiempo (5, 15 y 30 minutos)y se compara con la emisin de la suspensin sin muestra. A partir de estos datos se calcula la correspondiente EC50.
Inhibicin con Daphnia. El microcrustceo Daphnia es un decpodo frecuente en aguas continentales,

en las que se desplaza moviendo activamente sus apndices locomotores. El ensayo de inhibicin
consiste en poner en contacto, dentro de frascos apropiados conteniendo un agua exenta de contaminantes y de dureza adecuada, al menos 10 individuos jvenes por frasco con diferentes diluciones de
la sustancia problema. Como respuesta biolgica se observa la movilidad de los individuos. El ensayo
agudo dura 48 horas, al cabo de las cuales se cuentan los individuos inmovilizados y se calcula la
correspondiente EC50.
Los ensayos de ecotoxicidad con Vibrio y con Dahnia estn contemplados por normativas de aguas
residuales y de caracterizacin de residuos. As, a nivel autonmico existen diferentes legislacin de
control de vertidos industriales a la red integral de saneamiento que exigen la determinacin del parmetro sustancias inhibidoras mediante uno de los dos ensayos o mediante ambos. En cuanto a los
residuos, la Orden de 13 de Octubre de 1989 sobre mtodos de caracterizacin de residuos txicos y
peligrosos, incluye el ensayo de bioluminiscencia, y el ya sealado Real Decreto 363/1995 contempla
en su anexo V, parte C, el ensayo de ecotoxicidad con Daphnia.
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7. Tcnicas de anlisis biolgico.

Bajo este epgrafe se pretende encuadrar a aquellas tcnicas de anlisis ambiental vinculadas a la identificacin de especies macroscpicas, in situ o en el laboratorio, y a la elaboracin de ndices cualitativos y cuantitativos que permitan evaluar el impacto de los contaminantes sobre los ecosistemas. Es de
todos sabido que la biodiversidad es un parmetro relacionado directamente con la madurez y buena
salud de los ecosistemas, y que el conocimiento de las comunidades de organismos de un ecosistema
dado nos suministra valiosa informacin sobre alteraciones pasadas, y presentes, a veces demasiado
sutiles como para que queden de manifiesto a travs de anlisis fsico-qumicos ms o menos puntuales.
Existen muchas tcnicas de recogida, identificacin, y confeccin de ndices biolgicos. En esta apartado slo nos detendremos en considerar a algunas que se estn incorporando a la rutina de laboratorios y gabinetes de estudios con el fin de dar cumplimiento a la Directiva Marco del Agua. Segn esta
Directiva, antes de 2016 todos los pases miembros tienen que haber conseguido el buen estado ecolgico de sus masas de agua empleando para ello el estudio de sus comunidades de plantas acuticas,
peces, y macroinvertebrados bentnicos.
7.1. ndice ECOESTRIMED.

ECOESTRIMED (ECOlogical Status RIver MEDiterranean) pretende valorar la calidad de todo el
ecosistema fluvial en su conjunto. Para ello incluye la ribera adems de la calidad de las aguas. Requiere una escasa infraestructura y un tiempo corto de muestreo. Se calcula a partir de dos ndices de
calidad:
-
El de calidad biolgica del ro (FBILL o IBMWP)

El de valoracin del estado de conservacin de la ribera (QBR)
Los ndices FBILL y IBMWP estn basados en la diversidad y abundancia de los macroinvertebrados
bentnicos presentes en el ro. Entendemos por macroinvertebrados bentnicos aquellos invertebrados
de ms de 0,200 mm de tamao que habitan en el lecho fluvial durante toda su vida (moluscos) o
durante parte de su ciclo vital (muchos insectos con una fase adulta terrestre y otra larvaria, acutica).
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El ndice FBILL est indicado para zonas con piedras y corriente. Consiste en muestrear el lecho fluvial con la ayuda de una red de 250 micrmetros de malla, en varios puntos de tramos predefinidos
que cumplen una serie de caractersticas (anchura, longitud, situacin respecto a puentes y pasarelas).
Los ejemplares recogidos se guardan en frascos y se conservan con etanol al 70% o formol al 4% para
su posterior identificacin en el laboratorio con la ayuda de lupas binoculares y claves taxonmicas.
En funcin de las familias identificadas, y de la abundancia de cada una de ellas, se busca en unas
tablas el valor del ndice FBILL. Este ndice va del 0 (aguas extremadamente contaminadas) hasta el
10 (aguas con muy buena calidad).La presencia de familias tpicas de zonas contaminadas (Syrphidae,
Chironomidae rojos, Culicidae, Oligochaeta, Physidae), la baja diversidad, o la ausencia de macroinvertebrados da lugar a valores bajos, mientras que la presencia de familias propias de aguas limpias
(Plecoptera, Leuctridae, Tricpteros con estuche) proporciona valores altos.
Nivel de calidad
Aguas con muy buena calidad
Eutrofia, aguas con contaminacin moderada
Aguas contaminadas
Aguas muy contaminadas
Aguas extremadamente contaminadas
FBILL
8 a 10
6y7
4y5
2y3
0y1
El ndice IBMWP, est concebido para ros muy pequeos sin piedras o con muchas pozas. Las muestras se recogen con una red de las mismas caractersticas que en el ndice FBILL, y bajo unas condiciones de muestreo algo diferentes. Una vez identificados los diferentes taxones recogidos, a travs de
una tabla se les asigna un valor numrico, del 1 al 10, para cada familia (las familias indicadoras de
aguas limpias tienen un valor ms alto, y las de aguas sucias un valor ms bajo). Se suman todos los
puntos y se compara con una tabla en el que el IBMWP puede tomar valores desde <15 hasta >100:
Nivel de calidad
Aguas muy limpias
Eutrofia, aguas con contaminacin moderada
Aguas contaminadas
Aguas muy contaminadas
Aguas extremadamente contaminadas
IBMWP
> 100
61 - 100
36 - 60
16 - 35
< 15
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El ndice QBR, relativo a la calidad del bosque de ribera, se elabora a partir de visitas de campo en
las que se valoran una serie de inputs tabulados en una plantilla de campo. Estos inputs se ordenan en
cuatro bloques, cada uno con una puntuacin propia que va de 0 a 25. Estos bloques son:
-
Grado de cobertura de ribera y conectividad con el ecosistema forestal adyacente.

Estructura de la cobertura.
Calidad de la cubierta.
Grado de naturalidad del canal fluvial.
Sumando las puntuaciones de los cuatro bloques se obtiene el valor de QBR:

Nivel de calidad
Bosque de ribera sin alteraciones
Bosque ligeramente perturbado
Inicio de alteracin importante
Alteracin fuerte
Degradacin extrema
QBR
> 95
75 - 90
55 - 70
30 - 50
< 25
Con el ndice biolgico y el QBR calculados, se obtiene el ECOSTRIMED a partir de la siguiente

tabla:
ndice biolgico
FBILL
IBMWP
8-10
>100
6-7
4-5
0-3
61-100
36-60
<36
>75
MUY
BUENO
BUENO
MEDIOCRE
MALO
QBR
45-75
BUENO
< 45
MEDIOCRE
MEDIOCRE
MALO
PSIMO
MALO
PSIMO
PSIMO
3ECOSTRIMED
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BIBLIOGRAFA.
Anlisis Qumico. Ramiro Avidad, Ignacio de Orbe. Universidad de Granada. Granada

2006.
Standard Methods for the examination of water and wastewater. Grenberg, Arnold E.2005.
Estado actual y perspectivas en el empleo de la comunidad de macroinvertebrados bentncios como indicadores del estado ecolgico de los ecosistemas fluviales espaoles. A. Alonso, J.A.Camargo. Ecosistemas. 2005/3.
Tcnicas analticas de contaminantes qumicos. Miguel Angel Sogorb, y Eugenio Vilanova. Ed Daz de Santos S.A. Madrid 2004.
Qumica Analtica de los Contaminantes Medioambientales. CIEMAT. Madrid.2003.
ECOSTRIMED: protocolo para determinar el estado ecolgico de los ros mediterrneos.
Prat, N; Munn, A; Rieradevall, M. Sol. Diputacin de Barcelona. rea de Medio Ambiente. 2001.
UNE EN ISO 7899-2:2001. Calidad del agua. Deteccin y recuento de enterococos intestinales. Parte 2: mtodo de la filtracin de membrana.
UNE EN ISO 9308-1:2000. Calida del agua. Deteccin y recuento de Escherichia coli y bacterias coniformes. Parte 1: mtodo de la filtracin de membrana.
UNE EN ISO 6222: 1999. Calidad del agua. Enumeracin de microorganismos cultivables.
ISO 11731. Parte 1, 1998. Calidad del agua. Deteccin y enumeracin de Legionella.
Toxicologa Avanzada. M.Repetto. Ed. Daz de Santos S.A. Madrid 1995.
Toxicologa Ambiental. John H. Duffus. Ed Omega. Barcelona 1983.
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4.2.2. Tcnicas analticas instrumentales.

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4.2.2.1. Tcnicas ESPECTROSCPICAS

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