09 Cultivo LCR

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Meningitis Que es meningitis?

Examen del L.C.R. „ Inflamación e infección de las


membranas (meninges) y del líquido
céfalo raquídeo que rodea el cerebro y
la médula espinal.
Dr. Alfredo Guillén Oneeglio
„ Enfermedad seria con riesgo para el
Profesor Asociado
paciente y p
p para la comunidad
F
Facultad
lt d d
de T
Tecnología
l í Médica
Médi

Fundamentos Anatomía y lugares de infección

„ Procedimiento de emergencia
„ C i t
Corrientemente
t por microorganismos
i i
aerobios capsulados
„ Rara vez por bacterias anaerobias
(abscesos o infecciones localizadas)
„ Concentración de la muestra
„ Reporte inmediato

3 4

1
Causas Tipos de Meningitis
„ Bacterias „ Bacteriana
„ H. influenzae tipo b
„ Vi
Virus „ S. peumoniae
„ Hongos „ N. meningitidis
„ TEC „ Aséptica
„ Viral
„ Algunos tipos de cancer
„ Sifilítica
„ Enfermedades inflamatorias „ Fú i
Fúngica
„ Lupus „ C. neoformans
„ Enfermedades infecciosas „ Tuberculosa
„ Reacción a ciertos medicamentos „ Meningismo
5 6

ETIOLOGIA Streptococcus agalactiae


NEONATOS
„ Escherichia
E h i hi colili K1
„ Streptococcus agalactiae (Grupo B)

„ Listeria monocytogenes

„ Herpes simplex 2

> DE 2 MESES
„ Streptococcus agalactiae

„ Listeria monocytogenes

„ Escherichia coli
7 8

2
ETIOLOGIA
Neisseria meningitidis
10 AÑOS
„ Haemophilus influenzae

„ Streptococcus pneumoniae

„ Neisseria meningitidis

„ Virus

ADULTOS JOVENES
„ Neisseria meningitidis

„ Virus

ADULTOS
9Meningocococemia sin meningitis „ Streptococcus pneumoniae

9 9Meningitis aguda con o sin meningocococemia 10 „ Neisseria meningitidis

ETIOLOGIA ETIOLOGIA
ANCIANOS
„ Streptococcus pneumoniae INFECCIONES
„ Bacilos Gram negativos INTRAHOSPITALARIAS
„ Listeria monocytogenes „ Cepas multiresistentes

PACIENTES CON SIDA PACIENTES


„ Cryptococcus neoformans INMUNOCOMPROMETIDOS
PACIENTES CON TBC „ Streptococcus pneumoniae

„ Mycobacterium tuberculosis

11 12

3
CAUSAS DE MENINGITIS
Mundial, todas las edades Muestra de LCR
Coriomeningitis linfocítica
5%
„ Obtener en lo posible antes de
Streptococcus
administrar antibióticos
7%
Otros
10%
Paperas Otros „ Utilizar una técnica aséptica
15% 10%
„ Punción lumbar
Neisseria
meningitidis
Haemophilus „ Enviar en 3 tubos estériles: Bioquímica,
30% Desconocido
20%
30% microbiología y Recuento
S. pneumoniae „ Microbiología: Tubo 2 o el más turbio
25%
„ Volumen mínimo: 1 a 5 mL
13 BACTERIAS VIRUS 14

Punción lumbar

15 16

4
Punción lumbar Consideraciones Básicas
„ Envío inmediato al laboratorio
„ Si no se puede
d cultivar
lti de
d iinmediato
di t
„ Conservar en la estufa o
„ Conservar a temperatura ambiente
„ No refrigerar la muestra
„ Se puede utilizar un medio de transporte
„ Trans-Isolate modificado con Tris
„ Esperar reporte de Gram en menos de
30 minutos
17 18

Medio de transporte para meningitis


bacteriana Hallazgos en el LCR

Bacteriana Células Tipo


p Proteínas Glucosa

15-45 40-80
Normal 0-5 Células
mg/dl mg/dl

Bacteriana 20-2000 PMN 100-1000 <20

TBC 50-300
50 300 MN 60-700
60 700 20

Hongos 20-500 MN 100-700 30

Viral 10-350 MN 40-100 Normal

19 20

5
PROCESAMIENTO
MUESTRA DE LCR

„ Anotar el volumen de muestra recibido ASPECTO FISICO EXAMEN COAGLUTINACION


CULTIVO
DEL LCR DIRECTO LATEX
„ A t ell aspecto
Anotar t
„ Si la muestra es mayor de 1 mL Presencia de
S. pneumoniae
GRAM bacterias y AGAR
Centrifugar por 15 minutos a 1500 g H. influenzae b AGAR
„ leucocitos CHOCOLATE
N. meningitidis SANGRE
CO2
„ Aspirar el sobrenadante dejando 0.5 mL A, B y C
Presencia de
TINTA
hongos
„ Mezclar cuidadosamente CHINA
encapsulados
PRUEBAS PRESUNTIVAS
„ Sembrar los medios de cultivo ZIEHL Presencia de
SEROTIPIA
Y CONFIRMATORIAS
NEELSEN BAAR
„ Preparar los extendidos y la tinta china
ANTIBIOGRAMA
21

EXAMEN MICROSCOPICO EXAMEN MICROSCOPICO


„ Naranja de Acridina
„ Coloración de Gram
„ Más sensible y más rápido que Gram
„ Simple, rápido
Simple rápido, preciso y económico
„ Detecta un número menor de bacterias
„ Sensibilidad 75 - 90% sin tratamiento „ Bacterias de color rojo y leucocitos de verde
„ Con tratamiento: 40 - 60 % „ Mejor en pacientes con tratamiento
„ Determinar: células, leucocitos, hematíes „ Necesita microscopio de fluorescencia
„ Bacterias: coloración, forma, disposición y otras „ Tinta china
características „ Rápido, sensible,
Rápido sensible económico
„ Coloración de Wayson „ Detección de Cryptococcus
„ Simple, sensible „ Zhiel Neelsen
„ Detecta bacterias „ Fácil de realizar, económica
„ Es necesario otro frotís para Color. de Gram „ Poco sensible
23 24

6
Coloración de Gram LPMN 6 x c. DCG- IC tipo Neisseria
„ Células epiteliales y otras
„ L
Leucocitos
it
„ Hematíes
„ Bacterias y otros microorganismos
„ Forma: coco, bacilo, espiral
„ Coloración: Gram positivo o negativo
„ Asociación: pares, cadenas, racimos
„ Localización: Intra o Extra
„ Otras características: cápsula, espora
„ Hacer un diagnóstico microscópico
25 26

Tinción de Tinta china modificada Paciente de 66 a. Cuidador de ovejas

27 28

7
Gram de LCR Diagnóstico Post Morten

29 30

MEDIOS UTILIZADOS Prueba de la Oxidasa


„ Agar sangre de carnero
„ A
Agar chocolate
h l t d
de carnero
„ Caldo enriquecimiento
„ TSB
„ Caldo tioglicolato
„ Medios selectivos según Gram o
indicación médica

31 32

8
Bioquímica en CTA Serotipia

33 34

Optochin Solubilidad en bilis

35 36

9
Requerimiento de Factor V y X REPORTE
„ 24 Horas
„ Gram
„ Aislamiento inicial o Gram
„ Sin crecimiento a las 24 horas
„ Pruebas pendientes
„ Cada día
„ Avances
„ Cultivo
„ Identificación
„ Antibiograma
37 38

Paso
„ Sacar una hoja de papel
„ P
Poner su nombre
b
„ Numerar del 1 al 9
„ Informe:
„ Cada diapositiva es un campo
„ Tienen un minuto para hacer su informe

39 40

10
1. 2.

41 1000x 42
800x

3. 4.

43 44

11
5. 6.

45 46

7. 8.

47 48

12
9. Correlacione el crecimiento en agar
sangre y agar chocolate con:
Agar Sangre Agar Chocolate

1 1 Respuestas

2 2
3 3

A: S. pneumoniae B: Neisseria meningitidis C: Haemophilus influenzae


49 50

1. LPMN 30-40 x C, DCG+ lanceolados tipo 2. LPMN 2 x c, DCG+ tipo neumococo,


neumococo abundantes

51 52

13
3. LPMN 10-12 x c, CG+ en cadena tipo 4. LPMN 22-24 x C. CG+ en racimo tipo
Streptococcus Staphylococcus

53 54

5. LPMN 8-9 x C. BG- pleomórficos tipo 6. LPMN 8 x C. BG- pleomorficos


haemophilus formando cadenas tipo Haemophilus

55 56

14
7. LPMN 6-8 x C. DCG- IC y EC tipo 8. CE 1-2 x LPMN 1-2 x C. BG+ cortos IC
Neisseria tipo Listeria

57 58

9. Correlacione el crecimiento en agar


sangre y agar chocolate con:
Agar Sangre Agar Chocolate

1
1

2
3 2 3

A: S. pneumoniae B: Neisseria meningitidis C: Haemophilus influenzae


59 3 2 1 60

15
Barrera hemato encefálica TRANSMISION MADRE NIÑO
Madre colonizada con
Streptococcus grupo B

Célula
endotelial

50% 50%
Neonato no Neonato
colonizado colonizado
Tejido
conectivo

98% 2%
Asintomático Sepsis de comienzo
temprano
Células del Neumonía
Capilares cerebrales Capilares del plexo aracnoides Meningitis
61 coroideo 62

Esquema de Procesamiento del LCR

Líquido Céfalo Raquídeo

Recuento diferencial

Pruebas especiales Coloración Gram Cultivar

63 64
Coaglutinación o Látex Cultivo especial

16
FICHA DE ENVIO DE MUESTRA PARA DIAGNOSTICO
DE MENINGITIS
„ HOSPITAL
„ NOMBRE, EDAD, SEXO
„ DOMICILIO: calle, número, como ubicar
„ PROCEDENCIA: departamento, provincia, distrito
„ FECHAS: Inicio síntomas, Ingreso, alta, defunción
„ SIGNOS Y SINTOMAS
„ Fiebre, vómitos, nauseas, petequias,
„ Cefalea, rigidez de nuca, convulsiones, signos meningeos
„ TERAPIA PREVIA
„ FECHA: obtención y del envio de la muestra
„ DIAGNOSTICO PRESUNTIVO
„ EXAMEN SOLICITADO: cultivo, identificación, coaglutinación,
antibiograma
„ NOMBRE DEL MEDICO Y FIRMA

65 66

67 68

17
REMISION DE CULTIVOS Y/O MUESTRAS AL Meningitis meningocócica
LABORATORIO DE REFERENCIA Casos notificados 1998
„ Todas las cepas de Neisseria meningitidis o cultivos
presuntivos (DCGN, Oxidasa +) deben remitirse al Lab. de
referencia (regional o II.N.S.)
NS)
„ Utilizar un Medio de Transporte para Meningitis
„ Inocular las colonias en la fase líquida o 1 mL de LCR e Leyenda
incubar a 37°C por 24 horas. g > de 10 casos
„ Si no se puede cultivar, remitir las muestras a laboratorio g de 5 a 10 casos
g < de 5 casos
de referencia (> 50 PMN y presencia de DCGN)
g sin casos
„ No debe refrigerarse la muestra o cultivo
„ Identificación adecuada, ficha epidemiológica
„ Envase de bioseguridad.
Fuente: Bol. O.G.E.
69 70

Meningitis meningocócica Meningitis meningocócica


Casos notificados 1999 Casos notificados 2000

Leyenda Leyenda
g > de 10 casos g > de 10 casos
g de 5 a 10 casos g de 5 a 10 casos
g < de 5 casos g < de 5 casos
g sin casos g sin casos

Fuente: Bol. OGE, Sem. 52 Fuente: Bol. OGE, Sem. 29


71 72

18
Streptococcus pneumoniae resistente
a penicilina. USA

„ 1987 0.02%
„ 1991 1.3%
„ 1993 - 1994 3.2%

Fuente: MMWR 1994, 43:216, J Infect Dis 1996,74:996


73 74

Inmunidad del huesped


„ Anticuerpos séricos bactericidas
„ Adquisición transplacentaria (6 meses)
„ Infección o colonización con antígenos con
reacción cruzada (Neisseria, flora orofaringea o
intestinal)
„ Vacunación
„ Aumento de la susceptibilidad entre los 6
meses a los dos años
„ Desarrollo de inmunidad sérica bactericida
contra cepas que colonizan la nasofaringe

75 76

19
77 78

Agar Sangre:

79 80

20
Agar Sangre Agar Chocolate Carnero

81 82

21

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