Semana #5 UNFV 2023 Pruebas de Susceptibilidad

Facultad de Tecnología Médica
Semana N° 7:
Pruebas de susceptibilidad
antifúngica para levaduras
Asignatura: Micología
Mg. Roberto E. Rojas León
Semestre Académico 2021-A
Universidad Nacional
Federico Villarreal
EVOLUCION TAXONOMICA DE LAS LEVADURAS
Nº Increment Nº Increment
Fuente Año Referencia Géneros
o% Especies o%
Practical handbook of microbiology, 2008

Federico Villarreal
Epidemiología
• Levaduras en IIH del torrente sanguíneo
• 41.4%, comunicación personal (INSN, 2006-2008)
• Entre 1999 y 2000, casos de sepsis por hongos se
incrementa en 207% (USA)
• Candida spp, Aspergillus spp y Cryptococcus spp
Federico Villarreal
CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS, 20(1):133-163, 2007

Federico Villarreal
CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS, 20(1):133-163, 2007

Federico Villarreal
Normas CLSI
• Incremento de IFI y de antifúngicos
• Pruebas de susceptibilidad antifúngica GANAN
reconocimiento
• Métodos de referencia tanto macro y microdilución
de CLSI
• Levaduras, M27
• P (1992); T (1995); A (1997); A2 (2002)
• Mohos, M38
• P (1998); A (2002)
Federico Villarreal
P 2003
A 2004
Federico Villarreal
Federico Villarreal
Federico Villarreal
Método disco difusión

• Solo para levaduras
• Solo para Candida spp.
• No abarca otros géneros de levaduras ni dimórficos en su fase
de levadura
• Azoles y equinocandinas
• Resultados, 20 a 24 h. de incubación
• Mueller-Hinton en lugar de RPMI
• Disponibilidad
• Bajo costo
Federico Villarreal

• Punto de corte
• Caspofungina
• Fluconazol
• Voriconazol
Federico Villarreal

• Parámetros de QC
• Caspofungina
• Fluconazol
• Posaconazol
• Voriconazol
Federico Villarreal
Selección de los antimicrobianos en disco para

pruebas de rutina y reporte
• Pese a criterios interpretativos, no recomendado en

rutina:
• Decisión tomada por médico infectólogo, comité de
farmacia y terapéutica, personal de microbiología clínica y
el comité IIH.
• Para minimizar confusión, emplear nombres
genéricos.
• Número de agentes testados, deben ser limitados,
aún con pocos antifúngicos.
Federico Villarreal
Equipo y materiales
• Incubadora a 35 °C (±2 °C), con ambiente aeróbico.
• Estándar de turbidez McFarland 0.5
• Hisopos de algodón estériles
• Solución salina fisiológica estéril (8.5 g/L NaCl;
0.85%).
Federico Villarreal
Reactivos
• Medio Agar Mueller-Hinton + Glucosa 2% + Azul de
Metileno 0.5 μg/mL (MHS)
• Fácil disponibilidad
• Aceptable reproducibilidad lote a lote
• Suplemento
• Glucosa 2%, apropiado crecimiento
• Azul de metileno 0.5 μg/mL, incrementa zona de definición
• Puede ser suplementado ya sea pre o pos producción
Federico Villarreal
Preparación del medio de Mueller-Hinton agar suplementado

(1) y suplementación de las placas de MHA (2).
Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica, Pemán. 2007

Federico Villarreal
Reactivos
• pH de MHS
– 7.2 – 7.4, Tº amb. después de solidificado
• Macerar medio para sumergir el electrodo
• Dejar que una pequeña cantidad de agar se
solidifique alrededor del electrodo en un recipiente
de vidrio
• Usar electrodo de superficie calibrado
• Humedad
– Exceso en la superficie, secar en incubadora
o cabina de flujo laminar, tapa entreabierta
(10-30 min).
Federico Villarreal
Federico Villarreal
Reactivos
• Almacenamiento de discos
– Refrigerar los recipientes a ≤ 8 ºC o
congelación a -14 ºC, hasta ser utilizados.
• Preparación del estándar de turbidez
– Estándar de turbidez McFarland 0.5
Federico Villarreal
PROCEDIMIENTO
• Preparación del inóculo
• Cepas subcultivadas, sobre AS ó ASD (pureza y
viabilidad). T° 35 °C (±2 °C)
• Inóculo preparado picando 5 colonias distintas de aprox.
1 mm de Ø, 24 h, 5 ml de SSF estéril
• Agitar por 15 s y ajustar turbidez (1x106 a 5x106 cel/mL
Preparación inóculo levaduras
(M44-A2).
Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica, Pemán. 2007

Desarrollo de Levaduras sobre ASD 2%:
Gold Standar
Verificar pureza del aislamiento:
evita dolores de cabeza
bacterias
Chrom Agar: excelente alternativa
Coinfección
PROCEDIMIENTO
• Inoculación de las placas
– Dentro de los 15 min después de ajustar la
turbidez del inóculo, embeber el hisopo en la
suspensión, rotar varias veces y presionar
firmemente contra la pared interna del tubo
evitando el nivel del fluido.
– Agar MHS es inoculado por estriado uniforme
del hisopo en toda su superficie, dos o mas
veces, rotando la placa aprox. 60º cada vez,
finalmente el borde del agar.
– Tapa entreabierta, 3-5 min., no mas de 15 min
PROCEDIMIENTO
• Aplicación de los discos
– Los discos son dispensados sobre la
superficie de la placa inoculada, ligera presión,
aproximación entre discos no menor de 24
mm de centro a centro
– Invertir las placas e incubar dentro de los 15
min después que los discos son aplicados
DISCOS DE
FLUCONAZOL
25 μg
DISCOS DE
VORICONAZOL
1 μg
PROCEDIMIENTO
• Lectura de las placas e interpretación
– Examinar después de 20-24 h de incubación
– Zonas de inhibición uniformemente circulares y
desarrollo semiconfluente
– Sobre fondo negro no reflejante, iluminado
– Medir el diámetro de prominente reducción de
crecimiento
– Ignorar microcolonias en los bordes o grandes
colonias dentro de la zona de inhibición.
– Leer a las 48 h solo cuando insuficiente
desarrollo es observado a las 24 h
INTERPRETACION
M44-S3
2009
Clinical and Laboratory
Standards lnstitute (CLSI).
Performance Standards for
Antifungal Susceptibility
Testing of Yeasts. 1st ed.
CLSI supplement M60. 2017
Clinical and Laboratory Standards lnstitute (CLSI). Performance Standards for Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts. 1st ed.
Clinical and Laboratory
Standards lnstitute (CLSI).
Performance Standards for
Antifungal Susceptibility
Testing of Yeasts. 2nd ed.
Clinical and Laboratory Standards lnstitute (CLSI). Performance Standards for Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts. 2nd ed.
J Clin Microb; 2008, 46(6):1927-1929
Federico Villarreal
CONTROL DE CALIDAD
• Propósito (monitorear)
• Precisión (repetitibilidad) y exactitud
• Performance de reactivos
• Performance de la persona que realiza la prueba y lee los
resultados
CONTROL DE CALIDAD
• Utilizar cepas de referencia para el QC
– Candida albicans ATCC 90028
– Candida parapsilosis ATCC 22019
– Candida tropicalis ATCC 750
– Candida krusei ATCC 6258.
CONTROL DE CALIDAD
• Almacenamiento de cepas para el QC
– Minimizar posibilidad de mutación
– APD a -70 ºC
– Cepas de trabajo, AS o ASD a 2-8 ºC,
subcultivadas cada semana, no mas de tres
semanas
– Cepas congeladas o liofilizadas,
subcultivadas al menos dos veces antes de
su uso
CONTROL DE CALIDAD
• Diámetros límites del control de calidad
– Diario, si es satisfactorio semanal
Clinical and Laboratory Standards lnstitute (CLSI). Performance Standards for Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts. 1st ed.

Semana #5 UNFV 2023 Pruebas de Susceptibilidad

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Semana #5 UNFV 2023 Pruebas de Susceptibilidad

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Semana #5 UNFV 2023 Pruebas de Susceptibilidad

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Facultad de Tecnología Médica

EVOLUCION TAXONOMICA DE LAS LEVADURAS

Practical handbook of microbiology, 2008

CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS, 20(1):133-163, 2007

CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS, 20(1):133-163, 2007

Método disco difusión

Método disco difusión

Método disco difusión

Selección de los antimicrobianos en disco para

• Pese a criterios interpretativos, no recomendado en

Preparación del medio de Mueller-Hinton agar suplementado

Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica, Pemán. 2007

Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica, Pemán. 2007

También podría gustarte

Pfad - The Proxy pFad of © 2024 Garber Painting. All rights reserved.