Laminas Seminario de Lipasas
Laminas Seminario de Lipasas
Laminas Seminario de Lipasas
PURIFICACIÓN Y APLICACIONES
LÁMINA 1. PORTADA
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LAMINA 3 Reacciones catalizadas por lipasas
Las lipasas catalizan naturalmente la hidrólisis del enlace éster de los tri-, di-
y monoglicéridos en ácidos grasos y glicerol (comon la se muestra Fig. 2). Sin
embargo, también son activas en una amplia gama de sustratos. En todos los
casos, la reacción se lleva a cabo en la interfase de un sistema de reacción
bifásico. Este sistema bifásico resulta de la presencia de una fase orgánica
inmiscible, que contiene el sustrato hidrofóbico, en el agua
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Además, las lipasas pueden catalizar adición de Michael y reacciones de
epoxidación (Aouf et al., 2014).
Distribución en la naturaleza
Lipasas animales
Las lipasas se encuentran en todos los niveles del reino animal; desde los
invertebrados hasta los mamíferos, y participan en varios niveles del metabolismo
de lípidos como la digestión de la grasa, y la absorción, reconstitución y
metabolismo de lipoproteínas (Desnuelle, 1972).
Lipasas veretales
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Lipasas microbianas
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Bacillus y Streptomyces, seguidos de Burkholderia, Chromobacterium,
Achromobacter, Alcaligenes y Arthrobacter (Geoffry y Achur, 2018).
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Las enzimas lipolíticas se dividen en dos grandes grupos: las lipasas y las
esterasas o carboxilesterasas.(Ro et al., 2014) Las lipasas son específicas para
acilgliceroles con ácidos grasos de cadena larga (> 10 átomos de carbono), siendo
la trioleína su sustrato de referencia; mientras que las esterasas actúan
específicamente sobre acilgliceroles de cadena corta (< 10 átomos de carbono), y
otros esteres simples, siendo la tributirina su sustrato estándar.(Du et al., 2018).
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Tambien las Las esterasas pueden ser distinguidas de las lipasas por el
denominado “fenómeno de activación interfacial”, el cual solo ha sido observado
en lipasas.
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El peso molecular de las lipasas se sitúa en el rango de 19-60 kDa y se
conoce que son proteínas monoméricas.
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Influencia del pH
generalmente a pH neutro 7,0 o hasta pH 4,0 y 8,0 las lipasas son estables,
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Chromobacterium viscosum, A. niger y Rhizophus sp., producen lipasas
extracelulares que son activas a pH ácido, y Pseudomona nitroaeducens produce
lipasas alcalinas y activas a pH 11,0 (Silveira et al., 2017).
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El núcleo central es el responsable directo de la actividad catalítica y define
el plegamiento α/β-hidrolasa, común para muchas hidrolasas
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ubicación topológica de los residuos del sitio activo está señalada por
círculos. Las líneas discontinuas indican la localización de posibles
inserciones.
El centro activo de las lipasas permanece protegido por una cubierta que
impide la entrada del sustrato. Este solo tiene acceso cuando la enzima se
encuentra en su conformación activa y la cubierta se ha desplazado
(Derewenda et al., 1994b; Miled et al., 2003). Esta cubierta puede ser una
hélice a anfifílica (Lotti y Alberghina, 1996) o un lazo (Hui y Howles, 2002).
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El segundo grupo tiene una unión en forma de embudo, que incluye las
lipasas de C. antarctica, Burkholderia sp. y B. cepacia, así como las lipasas
pancreáticas de mamíferos.
El último grupo tiene un sitio de unión tipo túnel y comprende las lipasas de
C. rugosa, por ejemplo.
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Fig. 6. Forma de los tres tipos de sitios de unión de las lipasas identificados por
(Pleiss et al., 1998).
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Fig. 7. Rhizomucor miehei lipasa. En gris su conformación abierta con fosfonato de
dietilo, PDB 4TGL, (Derewenda et al., 1992) y en negro su conformación cerrada,
PDB: 3TGL, (Brzozowski et al., 1992).
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Activación interfacial
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En el estado agregado, los triacilglicéridos exhiben un grado de
ordenamiento elevado, que minimiza el número de estados conformacionales
que pueden presentar estas moléculas en solución acuosa, debido a la gran
flexibilidad de sus cadenas de ácidos grasos. Este efecto tiene implicaciones
favorables para el reconocimiento enzima-sustrato (Petersen, 1996).
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La cavidad oxianiónica
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Fig. 4. Dos tipos de agujeros de oxianiones. (a) Tipo G X en la lipasa de R. miehei
(entrada PDB 4TGL): dietilfosfonato estabilizado por enlaces de hidrógeno con
Ser82 y Leu145. (b) Tipo G X en la lipasa de C. rugosa (entrada PDB 1LPM): (1R)-
hexilfosfonato de magnesio estabilizado por enlaces de hidrógeno con Gly124 y
Ala210. El sustrato se muestra en negro y los enlaces de hidrógeno están
esquematizados con líneas de puntos.
El tipo de orificio oxiánico juega un papel importante en las especificidades
de las lipasas hacia sus sustratos. De hecho, las lipasas con el tipo GX suelen
hidrolizar sustratos con una longitud de cadena de carbono media y larga,
mientras que el tipo GGGX se encuentra en las lipasas específicas de longitud
corta y en las carboxilesterasas.
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Un tercer tipo de cavidad oxianiónica, el tipo Y, fue identificado por Fischer et
al. (Jaeger y Eggert, 2002). En el tipo Y la cavidad oxianiónica está formada por el
grupo hidroxilo de una cadena lateral de tirosina estrictamente conservada. Este
tipo se encuentra en la lipasa A de C. antarctica (familia abh38); en algunas
esterasas, como las de la cocaína, y en algunas lipasas bacterianas ((Jaeger y
Eggert, 2002; Irimescu et al., 2005).
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Mecanismo catalítico
Las lipasas catalizan la hidrólisis de lípidos por el mismo mecanismo que las serina
proteasas. El sitio activo presenta un residuo de serina (Esquema I.2) que es activado
por un residuo de histidina y aspartato, éstos hacen que el hidroxilo de la serina sea
altamente nucleofílico. Los tres residuos serina, histidina y aspartato constituyen
latríada catalítica.
Primer paso: el grupo acilo del éster es atacado por el oxígeno de la serina, que es
activado por los puentes de hidrógeno que forman la serina con la histidina y ésta con
el aspartato. Asíse genera un intermediario tetraédrico (A) cuya carga negativa se
estabilizaa través de enlaces hidrógeno por los residuos treonina y glutamina. Estos
residuos se encuentran en el hueco oxianión.
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Selectividad
Selectividad de tipo
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La selectividad de tipo está asociada a la preferencia por un sustrato
determinado, por ejemplo, tri-, di- o monoglicéridos.
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Regioselectividad
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lipasas con especificación sn -1 son producidas por Rhizopus arrizhus, Aspergillus
níger, Y. lipolytica, R. miehei, R. delemar y T. lanuginosus.
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Enantioselectividad
Una molécula quiral es una molécula con un centro asimétrico, que puede
adoptar dos formas enantioméricas, R y S. Los enantiómeros R y S son imágenes
especulares no superponibles entre sí (Fig. 8), cuyas propiedades químicas, como
el punto de fusión, la solubilidad y la reactividad, son muy similares. Sin embargo,
suelen tener propiedades biológicas diferentes. De hecho, un enantiómero
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determinado puede mostrar actividad terapéutica, mientras que el otro puede ser
inactivo o incluso tóxico (Kasprzyk y Baker, 2013). La enantioselectividad se
refiere a la preferencia de las lipasas hacia un enantiómero particular de una
molécula quiral, en una reacción química que implica una mezcla racémica
(mezcla de ambos enantiómeros). La enantioselectividad es, por tanto, de gran
interés en la industria farmacéutica.
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bacterianas se eliminan del caldo de cultivo después del proceso de fermentación
para obtener las lipasas extracelulares.
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sefarosa, sephacryl S-200
Pseudomonas aeruginosa Precipitación con sulfato de amonio, 4.96/54.1 (Bose and Keharia, 2013)
AAU2 cromatografía de permeación en gel
Staphylococcus sp Precipitación de sulfato de amonio, S-200 23.92/32 (Daoud et al., 2013)
Aneurinibacillus Cromatografía de intercambio aniónico Q- 15.6/19.7 (Masomian et al., 2013)
thermoaerophilus Sefarosa y filtración en gel Sephadex G-75
HZ
Stenotrophomonas maltophilia Precipitación de sulfato de amonio, 60.54/8.4 (Li et al., 2013)
CGMCC 4254 cromatografía hidrofóbica de la acción recíproca
(sus siglas en ingles, HIC)
Bacillus pumilus RK31 Centrífuga de velocidad, precipitación con 186/NR (Kumar et al., 2012a,b)
sulfato de amonio, filtración en gel sephadex
G- 200, celulosa DEAE (intercambio iónico)
Pseudoalteromonas sp. NJ 70 Precipitación con sulfato de amonio, fenil- 27.5/25.4 (Wang et al., 2012)
sefarosa 6FF, DEAE sephadex A-50
Chromohalobacter sp. LY7-8 Precipitación con sulfato de amonio, sephacryl 10.2/12.9 (Xin and Hui-Ying, 2012)
S-100
Halobacillus sp. strain LY5 Precipitación con sulfato de amonio, celulosa 8.7/10.3 Xin et al., 2012)
DEAE, sephacryl S-100
Staphylococcus aureus Cromatografía de fenil sefarosa CL-4B, 6.76/20 (Sarkar et al., 2012)
cromatografía de superosa-12
Bacillus subtilis NS 8 Ultrafiltración, DEAE-Toyopearl, sephadex G- 500/16 (Olusesan et al., 2011)
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Amycolatopsis mediterranei DSM Precipitación con sulfato de amonio, Q 398/36 (Dheeman et al., 2011)
43304 sefarosa HP y cromatografía en columna
toyopearl phenyl-650
Ralstonia sp. CS274 Precipitación con sulfato de amonio, 4/20.8 (Yoo et al., 2011)
ultrafiltración y cromatografía en columna de
fenil sefarosa CL-4B
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• y por el iodo.
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Las aplicaciones de las reacciones que pueden ser catalizadas por las
enzimas lipolíticas son múltiples y muy diversas:
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• En la industria cosmética y de perfumería se usan para producir por
esterificación mono- y diacilgliceroles que se emplean como surfactantes y
compuestos responsables del aroma (Sharma & Kanwar, 2014).
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Conclusiones
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décadas. Esto se debe a las peculiares propiedades funcionales que exhiben
estas moléculas, dado su carácter de enzimas interfaciales.
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Alternative Proxies: